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目的：本实验拟通过观察RhoC蛋白在人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC-M中的表达及抑制剂Y-27632对该细胞的作用，初步探讨RhoC蛋白在涎腺腺样囊性癌中的作用及可能作用机制，为进一步研究腺样囊性癌的生长、增殖机理以及寻找新的治疗手段提供一定的理论基础。
材料和方法：
1.材料：人涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株ACC—M由上海九院口腔颌面外科肿瘤实验室惠赠。羊抗人RhoC多克隆抗体购自Santa Cruz生物技术公司，鼠抗羊藻红蛋白标记荧光二抗购自Caltag Laboratories公司；HRP标记兔抗羊二抗购自KPL公司；Y-27632购自Biosource生物公司。
2.方法
1)免疫细胞化学ICC的方法检测ACC—M细胞中RhoC的表达情况，抗RhoC多克隆抗体作用浓度2μg/ml，荧光二抗作用浓度2μg／ml，以荧光显微镜下观察细胞胞浆出现藻红色荧光者为阳性。
2)四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT)检测不同浓度Y-27632对ACC—M细胞增殖的影响，给ACC—M细胞加入含0、2.5、5、10、20μmol／LY-27632的培养基培养24小时后，加MTT溶液终止培养并测量光密度值(OD)；
3)形态学观察ROCK抑制剂Y-27632对ACC—M细胞的作用，ACC—M细胞在含10μmol／LY-27632的培养基中培养1小时后镜下观察其形态改变；
4)Western Blot方法检测Y-27632作用下ACC—M细胞中RhoC蛋白的表达变化，采用BCA蛋白浓度测定法进行蛋白定量，SDS—PAGE凝胶电泳，转膜，一抗二抗孵育，ECL放射显影定影，Image Pro Plus5.0.2灰度值测定。结果用SPSS11.5统计软件进行数据处理，采用单因素方差分析。
实验结果：
1)ICC结果发现在ACC—M细胞胞浆中呈现藻红色荧光，说明RhoC蛋白在ACC—M细胞中阳性表达；
2)形态学观察发现Y-27632作用后的ACC—M细胞变成梭形，细胞长轴增加，细胞间连接消失，细胞膜不规则，皱缩不整齐，边界有丝状突起，有倾向凋亡的趋势；
3)MTT结果发现不同浓度Y-27632作用下检测到的OD值均比对照组小，在0μmol／L至10μmol／L药物浓度范围内，随着浓度升高，所测得OD值越来越小，在20μmol／L，浓度时略有上升；这说明抑制剂对ACC-M细胞的增殖有一定的抑制作用，且具有一定的浓度依赖性，当药物浓度为10μmol／L时抑制作用有显著意义；
4)Western blot结果发现不同浓度Y-27632作用下ACC—M细胞RhoC蛋白表达均有降低，且在浓度为10μmol/L时RhoC表达量最少，差异具显著意义。
结论： RhoC／ROCK信号通路能影响腺样囊性癌细胞的增殖，其抑制剂Y-27632在体外实验中对腺样囊性癌细胞的增殖起一定的抑制作用。