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肝癌是世界范围内第五大最常见恶性肿瘤，也是我国最常见的恶性肿瘤之一，是我国的第二癌症杀手。由于早期诊断和治疗难度大，肿瘤恶性程度高，预后往往不理想，给大众健康造成了极大的威胁。虽然以手术切除为主的综合治疗近年来取得了很大的进步，但许多成功接受手术切除并且术后联合多种辅助治疗的患者，其预后仍然不佳。其原因是多方面的，但主要还是肿瘤的早期诊断困难，发现时多已属晚期，治疗难度大，且术后肿瘤容易出现复发和转移。根据相关研究，多数肝癌患者主要死于转移相关的一些并发症。因此，研究肝癌侵袭转移各个环节中相关的分子调控机制，并针对其中的环节制定相应的治疗措施具有十分重要的临床意义。钠氢交换蛋白-1(Na~+/H~+exchanger1，NHE1)是表达于细胞膜表面的离子交换蛋白，其主要功能是调节细胞内外的pH值，并且可以通过肌动蛋白结合蛋白锚定肌动蛋白，发挥调节细胞骨架的功能。在许多肿瘤中都有NHE1的过表达或活性增强，并认为其参与了肿瘤细胞的增殖、凋亡、分化、侵袭和转移等多个过程。但是，钠氢交换蛋白-1在肝癌细胞中发挥着怎样的作用目前还不明确。目的本实验通过设计合成的特异性NHE1-siRNA为实验手段，研究NHE1在肝癌细胞系MHCC97-H侵袭转移中的作用及其相关机制。方法首先设计合成3条针对NHE1基因的特异性小干扰RNA (small inter-fering RNA，siRNA)，采用脂质体转染MHCC97-H肝癌细胞系，通过real timePCR和Western blot的方法检测转染后各组细胞NHE1mRNA和蛋白表达水平的变化，并检测转染后各组细胞内外pH值变化。选择一条抑制效率最高的NHE1-siRNA用于后续实验。然后用特异性NHE1-siRNA转染细胞，通过免疫荧光染色、扫描电镜、western blot、明胶酶谱、侵袭和迁移等实验方法检测转染后各组细胞相关指标的变化。结果1、将针对NHE1基因的siRNA成功转入肝癌细胞MHCC97-H后，realtime PCR、Western blot及细胞内外pH值检测结果显示，序列为（正义链：5′-GCCCUGUUAAUCAUUCCGUTT-3′，反义链：5′-ACGGAAUGAUUAACAGGGCTT-3′）的NHE1-siRNA抑制效率最高。将其作为后续实验用特异性siRNA。2、应用特异性NHE1-siRNA抑制肝癌细胞NHE1后，荧光显微镜和扫描电镜结果显示，NHE1-siRNA组MHCC97-H细胞发生回缩，极性减弱，细胞内肌动蛋白网排列紊乱，形成减少，细胞表面伪足回缩，形成减少或消失。迁移实验结果提示，转染特异性NHE1-siRNA后，细胞迁移能力减弱。3、应用特异性小干扰RNA抑制肝癌细胞NHE1后，侵袭实验显示，NHE1-siRNA组MHCC97-H细胞穿透小室基底膜的细胞数目明显减少。western blot和明胶酶谱实验发现转染NHE1-siRNA组细胞MMP-2和MMP-9表达和活性均降低。推测NHE1可能通过酸化细胞外环境，提高MMP-2和MMP-9的表达及活性，促进肝癌细胞MHCC97-H的侵袭和转移。结论NHE1可能一方面通过影响肝癌细胞的骨架和形态变化，调节细胞的运动能力；另一方面通过调节细胞内外pH值，上调MMP-2和MMP-9的表达和活性。两者共同作用促进了肝癌细胞的侵袭转移，而抑制NHE1可以抑制这一过程。提示其可以作为肝癌治疗的有效靶点。