五倍子鞣质促进早期釉质龋再矿化作用的HRTEM研究

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牙体硬组织的脱矿溶解,是龋病发生的关键过程。现代研究发现:龋病的发生是无数次牙体硬组织脱矿和再矿化循环累积的结果。当脱矿占据主导地位时,龋病逐渐形成;当再矿化占据主导地位时,龋损得以修复,龋病得以控制。因此通过促进牙体硬组织再矿化是预防控制龋病的一种有效方法,成为了近年的研究热点。天然药材由于来源纯天然、毒副作用小,经济实用,易于获得等众多优点在龋病防治研究中倍受关注。近年来,天然药材五倍子在龋病防治领域的研究日益受到重视。研究发现五倍子具有抑制主要致龋菌生长、粘附、代谢、产酸等功效,尤其发现五倍子对牙体硬组织的矿化也有影响。我们前期实验研究表明五倍子提取物中的鞣质类合物GCE和五倍子鞣质类化合物中的B组分GCE-B促进早期釉质龋再矿化的能力显著。高分辨率透射电子显微镜(HRTEM)是现代实验室中研究晶体的一种不可或缺的大型综合仪器。通过高分辨率透射电子显微镜可以从正空间直接观察到分子甚至原子的世界。它不仅能够对晶体进行高分辨率形貌观察而且兼具结构分析的功能。使用高分辨率透射电子显微镜研究釉质龋时,学者们发现:通过观察牙釉质磷灰石晶体的超微形貌变化,可以直观的判断牙釉质的脱矿再矿化现象。脱矿的牙釉质磷灰石晶体表现为晶体边缘或中央溶解;再矿化的牙釉质磷灰石晶体表现为溶解的边缘或中央有矿物沉积修复,或未被破坏的晶体边缘外延性生长,也可见生成新的晶体。目的:本课题拟在前期研究工作的基础上,采用高分辨率透射电子显微镜从超微晶体形貌学角度进一步研究五倍子鞣质促进早期釉质龋再矿化的作用,为五倍子防龋药物的研发提供更多的实验依据。方法:1、采用体外化学法制备牛切牙早期人工釉质龋。2、实验分组A组:去离子水组(阴性对照组)B组:五倍子总鞣质组(GCE组)C组:五倍子鞣质B组分(GCE-B组)D组:NaF组(阳性对照)D组浓度1000ppm;B、C组浓度4000ppm,pH值用2mol.L-1的NaOH调至7.03、体外Ph循环模型诱导牙釉质龋发生再矿化。4、离子减薄法制备龋损体部HRTEM样品5、高分辨率透射电子显微镜观察结果:去离子水组HRTEM像可见大量脱矿的牙釉质磷灰石晶体。表现为晶体边缘溶解,晶格消失,残留的晶体边缘呈锯齿状,晶体棱角变的圆钝,或晶体中央溶解,形成中央穿孔。未发现晶体再矿化修复现象。GCE组、GCE-B组HRTEM像可见再矿化的牙釉质磷灰石晶体,表现为溶解的晶体边缘或中央有新沉积的矿物修复,使晶体锯齿状的脱矿边缘因修复而平整,新沉积的晶胞不断长大并融合,最终可将整个穿孔区填满。新沉积的晶体与残存晶体间的结合是有缺陷的,随修复深入逐渐移行,趋于正常。GCE组和GCE-B组HRTEM像类似于阳性对照组NaF组。结论:本实验通过高分辨率透射电子显微镜观察,发现五倍子鞣质组釉质样品龋损体部有再矿化现象的发生,从超微晶体形貌学角度进一步证明了五倍子鞣质具有促进早期牙釉质龋再矿化的作用。为五倍子防龋药物的研发提供了更多的实验依据。
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