植物灰霉病菌致病力分化及菌株JXstr36中真菌病毒的研究

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灰葡萄孢(Botrytis cinerea)可以引起多种作物灰霉病,造成巨大的经济损失。本论文对植物灰霉病菌致病力分化和菌株JXstr36中的真菌病毒进行了研究,结果如下:一、本研究从辽宁省、河北省、湖南省、吉林省、江西省和山东省6个省份灰霉病样品上分离获得566株灰霉菌株,通过接种本氏烟离体叶片的方法测定了其致病力,结果表明中强致病力(病斑直径大于10mm)灰霉病菌的比例为96.3%,而弱致病力菌株(病斑直径小于等于10mm)的比例仅为3.7%。通过对弱致病力菌株致病力的重复测定,最终获得了7株表型稳定的弱致病力灰葡萄孢。二、采用灰葡萄孢特异性引物对7个弱致病力菌株的DNA进行PCR检测表明,均属于灰葡萄孢。生物学特性研究表明,7株灰葡萄孢培养形态基本正常,菌株的生长速度存在差异但均比菌株B05.10慢。7株灰葡萄孢除菌株SY18以外均可以产生分生孢子,且有些菌株的分生孢子产量比菌株B05.10的高,但是只有菌株SDtom39和BJstr8有菌核产生。说明弱致病力菌株在生物学特性上存在一定多样性。三、在培养形态正常的弱致病力菌株JXstr36中检测到了4条dsRNA条带,依照大小分别命名为条带dsRNA-A、dsRNA-B、dsRNA-C和dsRNA-D,并且对这4条带分别进行了序列的克隆和分析。结果表明dsRNA-A的大小为10197 bp(去除poly A尾巴)其核酸序列分别与Phomopsis longicolla hypovirus(PlHV)和Sclerotinia sclerotiorum hypovirus 1(SsHV1)有67%和67%的一致性,因而被认为可能是真菌病毒,被病名为Botrytis cinerea hypovirus 1/JXstr36(BcHV1/JXstr36)。BcHV1/JXstr36含有一个大的ORF编码一个多聚蛋白,这个多聚蛋白含有RdRp、UGT、Prot、Hel等保守结构域。四、片段dsRNA-B大小为3913 bp(去除poly A尾巴),与SsHV1部分序列有一致性,其与BcHV1在5’-UTR和3’-UTR有很高的一致性,但中间部分序列并无明显一致性,因此猜测dsRNA-B可能是BcHV1的卫星RNA。dsRNA-C和dsRNA-D大小分别为1386 bp和778 bp,经过比对分析表明dsRNA-C和dsRNA-D均为dsRNA-B的缺陷型RNA。
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