RNA干扰（RNA interference，RNAi）现象是一种由双链RNA（double-strand RNA，dsRNA）启动的序列特异性基因沉默机制。RNAi从线虫到人类细胞都广泛存在，是一种先天性抗病毒的自我防御方式，能够抵抗外源基因或病毒的入侵。然而，病毒在受到RNAi抵抗过程中会通过病毒蛋白或非编码的病毒RNA来抑制RNA沉默，即RNA沉默抑制子（RNAsilencing suppressor，RSS），从而使病毒在宿主细胞内复制、增殖，促进病毒感染。目前，已从植物、动物和人类病毒中鉴定了20多种RSSs，并且这些RSSs中大部分都是干扰素的拮抗蛋白。猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难为主要特征的病毒性疾病，给养猪业造成重大的经济损失。PRRS是由PRRSV引起的，PRRSV是有囊膜的单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒属（Arterivirus），动脉炎病毒科，套式病毒目(Nidoviruses)。基因组全长约15kb，含有9个开放性阅读框（ORFs），其中，ORF-1编码14中非结构蛋白（nsps），nsps除了具有复制、蛋白酶、聚合酶的功能外，同时还能抑制干扰素的产生；ORF2-7编码病毒的结构蛋白。RNAi作为宿主细胞抑制病毒复制、清除病毒的一种先天性免疫机制，是宿主重要的免疫防御系统，许多持续性感染的病毒都存在一定的机制拮抗RNA诱导的基因沉默。PRRSV存在免疫抑制和持续性感染的免疫学特性，并且PRRSV的感染能抑制干扰素的产生，表明PRRSV可能会存在抑制RNA诱导的基因沉默的作用，从而逃避宿主先天性的抗病毒免疫。本研究利用RNAi技术，将人工合成的dsRNA和shRNA、mi-RNA干扰表达质粒分别转染MARC-145细胞，dsRNA、shRNA和mi-RNA靶向的目标基因是萤火虫荧光素酶报告基因（Luciferase，Luc），经双荧光素酶报告检测系统检测，发现dsRNA、shRNA和mi-RNA均抑制了转染的细胞Luc的表达量，表明在MARC-145细胞上成功构建了dsRNA、shRNA和mi-RNA诱导的基因沉默的模型；PRRSV与RNAi模型共作用于MARC-145细胞，发现PRRSV能够恢复被抑制的Luc的表达量，证实PRRSV能够抑制RNA诱导的基因沉默；PRRSV的nsp1和nsp11分别与RNAi模型共转染MARC-145细胞，nsp1和nsp11同样也能恢复被抑制的Luc的表达量，其中，nsp1可以自水解为nsp1α和nsp1β，nsp1能够恢复被抑制基因表达量主要是通过nsp1α实现的，nsp1α和nsp11可能是RNA沉默抑制子；分别构建nsp1α和nsp11的突变体使nsp1α的木瓜蛋白酶活性和nsp11的核酸内切酶活性都失活，nsp1α和nsp11的突变体分别与RNAi模型共转染MARC-145细胞，然而，这些突变体不能抑制RNAi诱导的基因沉默，这揭示nsp1α的木瓜蛋白酶活性和nsp11的核酸内切酶活性对nsp1α和nsp11发挥RSS活性起关键性作用。在MARC-145细胞上，PRRSV抑制了shRNA、 dsRNA和miRNA诱导的RNA沉默，并且PRRSV的非结构蛋白nsp1和nsp11具有抑制RNA诱导的基因沉默的作用，nsp1α和nsp11是RNA沉默的抑制子，nsp1α的木瓜样蛋白酶的活性和nsp11的核酸内切酶活性分别是nsp1α和nsp11发挥抑制RNA诱导的基因沉默活性所必需的。