【摘 要】
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将NaCl添加到MS培养基(终浓度为200mmol/L)中对烟草(Nicotiana tobacum,cultivar BY-2)原生质体进行盐胁迫,胁迫4小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到明显的梯状DNA条带,表
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将NaCl添加到MS培养基(终浓度为200mmol/L)中对烟草(Nicotiana tobacum,cultivar BY-2)原生质体进行盐胁迫,胁迫4小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳图谱上观察到明显的梯状DNA条带,表明NaCl处理诱发了DNA核小体间的断裂,从而表现出典型的细胞程序性死亡的生化特征.彗星电泳的也得到了类似的结果.在动物细胞凋亡研究中,流式细胞仪应用的非常广泛.该实验中,我们尝试将流式细胞术引用到我们的实验体系研究中来.对流式细胞仪上出现的亚二倍体峰(sub-G<,1>峰)进行的分析统计表明,其统计的细胞PCD百分率和彗星电泳统计的百分率无显著差异,表明流式细胞仪可以在该实验体系中应用.线粒体膜通透性转换孔道(mitochondrial permeabiliitv transition pore,PTP)在调控动物细胞凋亡过程中有重要作用.在实验中,我们采用流式细胞术来研究在盐胁迫诱导的原生质体PCD过程中是否有PTP和细胞氧化还原状态的参与.盐胁迫后,线粒体膜电位(△ψ<,m>)的显著下降和TBARS含量的显著升高均早于PCD的出现,预先用环孢菌素A(cyclosporineA,CsA)处理可以显著的延迟PCD的发生,同时也显著的抑制了△ψ<,m>的降低和TBARS的含量增加.外加抗坏血酸(AsA)显著降低了PCD的百分率和TBARS含量,使△ψ<,m>维持在比较高的状态,添加H<,2>O<,2>则效果正好相反,但H<,2>O<,2>的效应可以被CsA部分抵消.这些结果表明:1)细胞的氧化还原状态都参与了盐胁迫诱导的烟草原生质体PCD过程,另外利用改变CO<,2>浓度成功的改变了两品种小麦的氧化还原状态,同时也显著了改变了PCD发生的时间,进一步证明细胞的氧化还原状态参与植物的PCD可能是一个比较普遍的现象.2)PTP的开放状态也参与了PCD的调控过程而且细胞的氧化还原状态和PTP的开放状态可能有相互促进的作用,这意味着一旦细胞内活性氧增加,就可以通过线粒体形成一个自我扩增的过程,这种正反馈效应使这一过程一旦启动就不能逆转,这也进一步证明了PTP是PCD过程的核心调控因素的假说.
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