组蛋白乙酰化是一种重要的组蛋白修饰,广泛参与转录调控、细胞信号传导以及代谢等多种生物学过程。染色质中的组蛋白乙酰化会促进染色质结构打开,激活转录,促进相关基因的表达。相反地,组蛋白去乙酰化会导致相关基因表达沉默。溴结构域是一种在进化上高度保守的蛋白结构域,介导组蛋白乙酰化的识别,广泛存在于多种染色质和转录相关蛋白中。CECR2（Cat eye syndrome critical region protein 2）是一种具有溴结构域、能识别乙酰化赖氨酸残基的表观遗传调控因子。CECR2通过与SNF2H和SNF2L相互作用参与染色质重塑过程,也在DNA损伤反应、神经形成和精子发生中发挥关键作用。CECR2的突变及异常表达与猫眼综合征、喉鳞癌和乳腺癌转移等多种疾病密切相关。NVS-CECR2-1和GNE886是目前现有的高效CECR2选择性抑制剂,但是存在细胞毒性大、与CECR2相关的功能和机制不明确等问题。因此研究发现靶向CECR2的小分子抑制剂对于CECR2的生物学功能研究和相关疾病的药物研发有着重要的研究意义与前景。在本文中,我们建立了基于均相时间分辨荧光法（Homogeneous Time Resolved Fluorescence,HTRF）技术的CECR2小分子抑制剂高通量筛选方法,并对蛋白浓度、多肽浓度和DMSO浓度等反应条件进行了优化。通过测定Z-factor和阳性化合物NVS-CECR2-1的IC50,证明了该方法具有较好的稳定性及可靠性,适合作为CECR2抑制剂的高通量筛选方法。之后基于已建立的靶向CECR2的小分子抑制剂高通量筛选方法对实验室的化合物库进行筛选,经过两轮筛选得到8个抑制活性较好的活性化合物,IC50均小于1μM。并通过微量热泳动实验、自旋回波序列脉冲实验（CPMG）和饱和转移差谱实验（STD）进一步确证活性化合物是否与CECR2蛋白直接结合,排除HTRF实验可能存在的假阳性结果,最终得到了苗头化合物BAY,对CECR2的IC50值为390 n M,Kd值为4.27μM。通过测定BAY对BRD家族蛋白抑制活性验证了其选择性,并通过分子对接分析了BAY与CECR2溴结构域的结合模式。鉴于BAY在分子水平展现出较好的活性,我们在细胞水平进一步探究其活性及作用机制。通过增殖抑制实验验证了BAY的抗肿瘤活性,它可以抑制乳腺癌、结肠癌、肝癌等多种肿瘤细胞的增殖。通过划痕实验检测BAY对乳腺癌细胞迁移的影响,验证了BAY对乳腺癌细胞迁移的抑制作用。通过蛋白质免疫印迹实验检测了NF-κB蛋白的表达,验证了BAY能抑制NF-κB蛋白p65和p50的表达,抑制CECR2溴结构域与乙酰化p65的结合。综上所述,本研究工作建立了基于HTRF技术的CECR2小分子抑制剂高通量筛选方法,为CECR2新型小分子抑制剂的发现奠定了基础。通过高通量筛选发现的具有全新化学结构的苗头化合物也为CECR2新型小分子抑制剂的设计与改造提供了新的方向,为进一步研究CECR2的生物学功能提供了新的化学探针,为相关疾病的靶向治疗提供了新的策略。