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卵巢是雌性哺乳动物生殖系统的重要组成部分。卵巢或卵巢组织冷冻保在物种保存、人类医学、畜禽育种与繁殖等方面具有十分重的意义。对卵巢组织进行冷冻保存,能够充分利用卵源,为体外受精、核移植和转基因等胚胎工程技术的研究和应用提供充足的材料。本实验以五周龄昆明小白鼠的卵巢为材料,研究了冷冻保护剂、平衡时间、冷冻载体和组织块大小对卵巢组织玻璃化冷冻效果的影响,解冻后收集组织中未成熟卵,并进行体外培养和体外受精,以观察其体外成熟、体外受精及所形成胚胎的发育能力,以期建立卵巢组织玻璃化冷冻保存的有效方法。为了评价冷冻液和平衡时间对小鼠卵巢组织冷冻保存效果的影响,将卵巢组织分别用7.5% ED(7.5% EG(乙二醇)+7.5% DMSO(二甲基亚砜))和7.5% PD(7.5% PROH+7.5% DMSO)的预处理液分别处理10min、15min和20min,再通过15%ED(15%EG+15% DMSO)和15% PD(15% PROH +15% DMSO)的玻璃化冷冻液处理3min,投入液氮进行冷冻,解冻,然后脱除冷冻保护剂,刺破卵泡,分离出卵母细胞进行培养,成熟后进行体外受精,与不经冷冻的卵巢组织(对照组)直接分离出卵母细胞在体外培养成熟后直接进行体外受精进行对比。结果发现,15%ED处理15min组成熟率和卵裂率(43.2%和18.8%)与15% PD组(37.4%和10.5%)差异显著(P<0.05),均显著低于对照组(81.04%和65.62%()P<0.05);所有处理20min组的成熟率和卵裂率(36.9%和11.4%)均显著低于对照组(81.04%和65.62%)(P<0.05)。说明ED冷冻保护剂对小鼠卵巢组织玻璃化冷冻的效果优于PD冷冻保护剂。采用半麦管、冻存管和离心管三种不同的冷冻载体开展小鼠卵巢组织冷冻保存。结果发现,半麦管为载体冷冻保存的卵巢组织在解冻后分离的卵母细胞成熟率(41.8%)显著高于冻存管(40.8%)和离心管(38.3%)(P<0.05),同时冻存管和离心管的差异也达到显著水平(P<0.05);半麦管、冻存管和离心管为载体冷冻保存的卵巢组织在解冻后分离的卵母细胞,经体外受精后的卵裂率分别为15.3%、16.9%和11.3%,其中前两者差异不显著(P>0.05)),但极显著地高于离心管(P<0.01)。说明半麦管更适合用于小鼠卵巢组织的冷冻保存。为了比较卵巢组织块大小对小鼠卵巢组织冷冻保存效果的影响,把卵巢组织切成四块进行冷冻与整个卵巢组织冷冻后发现,卵巢组织切块分离出的卵母细胞成熟率和卵裂率(44.4%和19.0%)显著高于整个卵巢(36.2%和10.4%)差异显著(P<0.05),说明分割卵巢组织块更适合于冷冻保存。综合本实验的结果表明,小鼠卵巢组织玻璃化冷冻时,将卵巢切成四块,用半麦管作为载体,7.5%ED平衡15 min,15%ED的玻璃化冷冻液处理3 min后,可以获得较好的冷冻效果。