【摘 要】
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目的探究多房棘球蚴分泌物抗原（Echinococcus multilocularis Secreted antigen,Em-s Ag）对小鼠骨髓来源的树突状细胞（Bone marrow derived dendritic cell,BMDC）的成熟度的影响,并探究其作用机制。方法1,从多房棘球蚴感染小鼠中提取Em-s Ag,并对其进行测序比对;2,用GM-CSF刺激骨髓前体细胞形成BMDC,流式
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目的探究多房棘球蚴分泌物抗原（Echinococcus multilocularis Secreted antigen,Em-s Ag）对小鼠骨髓来源的树突状细胞（Bone marrow derived dendritic cell,BMDC）的成熟度的影响,并探究其作用机制。方法1,从多房棘球蚴感染小鼠中提取Em-s Ag,并对其进行测序比对;2,用GM-CSF刺激骨髓前体细胞形成BMDC,流式细胞术鉴定细胞纯度,用扫描电镜鉴定细胞形态;3,采用高（660μg/m L Em-s Ag）、中（132μg/m L Em-s Ag）、低（66μg/m L Em-s Ag）浓度的Em-s Ag与BMDC共培养24 h,同时设置阴性对照组（Control组）和阳性对照组,即LPS组（1μg/m L LPS）,流式细胞术检测各浓度Em-s Ag干预组中CD80、CD86、MHC-II分子的表达情况,ELISA检测各浓度Em-s Ag干预组中IL-12p40、TNF-α表达水平;4,采用不同浓度的Em-s Ag（3 mg/m L、1.5 mg/m L、0.75 mg/m L、0.375 mg/m L Em-s Ag）与LPS诱导BMDC共培养24 h,同时设置Control组和LPS组,流式细胞术检测各浓度Em-s Ag干预组中CD80、CD86、MHC-II分子的表达情况,ELISA检测各浓度Em-s Ag干预组中IL-12p70表达水平;5,为探究其具体机制,将BMDC分为四组,即Control组、LPS组、LPS+Em-s Ag组和Em-s Ag组,采用q PCR和Western Blot检测TLR4、My D88、NF-κB m RNA和蛋白的表达水平。结果1,病灶内COX 1、NAD1、Cyt B在NCBI的比对结果分别是99%、99%、97%,证明该物种来源于多房棘球蚴感染;2,扫描电镜观察到BMDC的典型形态,流式细胞术检测BMDC表面CD11c阳性率在70%左右;3,与Control组相比,高、中、低浓度Em-s Ag组BMDC表面的CD80、CD86、MHC-II无统计学意义,P＞0.05,BMDC分泌的TNF-α、IL-12p40也无统计学意义,P＞0.05;4,与LPS组相比,LPS+3 mg/m L Em-s Ag组、LPS+1.5 mg/m L Em-s Ag组、LPS+0.75 mg/m L Em-s Ag组、LPS+0.375 mg/m L Em-s Ag组中BMDC的CD80（F=34.870,P＜0.05）显著减少,CD86、MHC-II无明显减少,P＞0.05。ELISA的结果表明,与LPS组相比,各浓度Em-s Ag的干预组均可降低LPS诱导BMDC表达IL-12p70,P＜0.05,有统计学意义,且Em-s Ag浓度越高,降低IL-12p70的效果越明显;5,与Control组相比,Em-s Ag组中TLR4、My D88、NF-κB m RNA和蛋白的表达量无统计学意义,P＞0.05,与LPS组相比,LPS+Em-s Ag组中TLR4、My D88、NF-κB m RNA和蛋白的表达量也无明显变化,P＞0.05。结论多房棘球蚴的免疫逃逸可能与BMDC表面的共刺激分子降低及IL-12p70下调有关。Em-s Ag可能没有激活BMDC中的TLR4/My D88/NF-κB信号通路。
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