雪峰虫草Ophiocordyceps xuefengensis T.C.Wen是近年来发现的虫草新种,是雪峰虫草菌与疖蝙蛾幼虫的复合体,研究发现雪峰虫草与冬虫夏草亲缘关系最为接近。目前,对于雪峰虫草的研究,已有其显微特征和化学成分方面的报道,但关于其人工培育及生活史的报道尚未出现。本文首次对雪峰虫草的生活史进行了较为系统的研究,主要内容及结果如下:1.雪峰虫草的人工培育优化雪峰虫草的培育条件,观察各个阶段的生长状况,同时收集孢子进行萌发实验。结果表明:菌丝初期呈白色,细绒毛状,成熟后呈淡锈色;成熟的菌丝互相扭结,形成小原基,小原基逐渐膨大,分化为无性子座,子座顶端呈白色,中下部呈淡锈色;继续培育,无性子座逐渐增大,顶端仍呈白色,中下部呈深锈色;分生孢子可萌发,形成菌丝体。2.雪峰虫草不同发育时期形态解剖学观察取不同发育时期的雪峰虫草,制作临时装片,用刚果红溶液染色,结果表明:a.菌丝有隔膜,分支。b.菌丝间有“H”型融合现象。c.分生孢子梗单生,不分支或分支。d.无性子座可以分为皮层和髓部。取无性子座,冷冻干燥、喷金后通过透射电镜观察,结果表明:无性子座表面密布着无性孢子,孢子呈卵圆形或圆形,大小为(3.2~5.0)um×(2.1~3.3)um,且表面光滑,每个产孢细胞均只产生一个分生孢子。子座的皮层与髓质都是由菌丝细胞构成,皮层细胞较小且排列紧密,髓质细胞之间有明显的间隙。用荧光染料DAPI分别对成熟菌丝、无性子座表面菌丝和分生孢子染色,荧光显微镜观察,结果表明:不同生长阶段的菌丝细胞粗细长短不等,但隔膜清晰可见。成熟菌丝细胞和无性子座表面菌丝细胞均存在单核、双核现象,但分生孢子为单核。3.SNPs分子标记在雪峰虫草生活史研究中的应用本实验通过构建雪峰虫草的基因组文库,以基因组文库为模板设计了30对引物,用同一引物对对不同菌株中进行扩增,序列比对、分析,比较不同菌株或样品基因型的差异。在雪峰虫草中,鉴定出36个SNPs位点,SNP发生率为0.129%。通过分析基因序列和图谱,证实雪峰虫草的菌丝体及无性子座均是同核体,成熟子座中具有子囊壳的部位是异核体。4.雪峰虫草交配型基因MAT1-1-1与MAT1-2-1的检测基于冬虫夏草交配型基因MAT1-1-1与MAT1-2-1的保守序列分别设计特异性引物,对不同雪峰虫草样本进行扩增,经检测、分析发现:雪峰虫草的僵虫体、子座(未具有子囊壳)、分离菌株均只含单一交配型基因MAT1-1-1或MAT1-2-1,而在子座的成熟部位(具有子囊壳)同时具有有MAT1-1-1和MAT1-2-1两种交配型基因。从多种样本检测结果表明:雪峰虫草是以异宗配合的方式进行有性生殖。综上所述,我们推测雪峰虫草的生活史为:在野外环境中,雪峰虫草菌的孢子侵染疖蝙蛾幼虫,在虫体内孢子萌发长出菌丝。当菌丝生长到一定阶段,扭结形成僵硬的菌核。在一定环境条件下,只含单一交配型基因的同核体菌丝可形成无性子座,并产生分生孢子。当无性子座发育成熟,在子座表面接受与其交配型基因互补配对的孢子,发生质配和核配从而进行雪峰虫草的有性生殖。