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目的:牙种植体周围龈沟液微生物群落的研究,是牙种植学微生物学环境研究的一个重要组成部分。变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)技术是由Fischer等于1979年提出的用于检测DNA突变的一种电泳技术。它通过核酸信息对微生物群落进行表征,较传统的菌种分离培养技术更快捷并能鉴定出现有技术难以培养的细菌。DGGE指印技术可用来监测口腔唾液和菌斑中微生物菌群的瞬间和发展中的变化。而聚合酶链反应—变形梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction—based denaturing gradient gel electrophoresis, PCR—DGGE)技术则可直接检测到口腔不同标本中的各种细菌微生物。本研究选择符合实验标准的人群,研究种植术后不同时间段种植体周龈下优势菌群,对种植术后临床干预提供依据。方法:实验选取20名成都军区口腔种植与修复临床专科中心的种植患者,年龄介于20~60岁之间,性别不限。选用的种植体为直径3.75×8.5mm或者3.25×8.5mm的德国BEGO柱状种植体,在种植术后1月、3月采集其种植体周龈沟液作为实验组样本,健康邻牙的龈沟液作为对照组样本,分别提取这些样本的DNA后并直接进行PCR-DGGE实验分析,比较种植体周龈沟液和天然牙龈沟液优势菌群的异同。使用SPSS13.0统计软件。结果:1、基因组抽提试剂盒法提取的基因组DNA条带亮度明显高于基于SDS细胞裂解法提取的DNA条带亮度,基于SDS细胞裂解法提取基因组DNA需要的时间是基因组抽提试剂盒法提取基因组DNA的2倍,基因组抽提试剂盒法提取的微生物基因组DNA具有DNA浓度大、纯度好,并且省时等优点。2、16S rDNA V3区PCR的结果所示,电泳结果显示各样本提取的DNA,PCR以后结果均为阳性,适合进行DGGE分析。3、龈沟液菌群UPGMA相似性聚类分析结果:通过UPGMA相似性聚类分析我们可以看出,横向比较:每个患者第一个月实验组和对照组相似性较小;第三个月时实验组和对照组相似性较小。纵向比较:两个时期实验组相似性较小,对照组之间相似性较小。每个患者之间相似性较小。4、DGGE图谱的多样性指数分析结果:种植体周龈沟液微生物丰富度、天然牙龈沟液微生物丰富度、第一个月龈沟液微生物丰富度、第三个月龈沟液微生物丰富度相似,无统计学意义(p>0.05)。5、测序结果:种植体组和天然牙组优势菌无显著不同。主要的微生物有:消化链球菌、梭菌属、真核生物、古细菌、牙龈卟啉单胞菌、和普雷沃氏菌科,以革兰氏阴性厌氧杆菌为主,培养出古细菌、巴斯德氏菌属、劳特罗普氏菌属、噬二氧化碳菌等不常见的细菌;第一个月种植体周龈沟液无梭杆菌属,但密螺旋体显著高于天然牙周龈沟液,第三个月种植体周龈沟液和天然牙周龈沟液中密螺旋体,梭杆菌属基本相同;结论:本实验通过PCR-DGGE技术对两个时期种植体周和天然牙周微生物优势菌的检测,检测出健康种植体周和天然牙周龈沟液的菌群以革兰氏阴性厌氧菌为主,种植体植入第一个月可疑致病菌更易聚集在种植体周,第三个月种植体周和天然牙周微生物的优势菌趋于一致,厌氧杆菌的比例增高,但是种植体周围软组织没有发生炎症。指导临床按照正常牙周一样对种植体进行维护,预防炎症发生。