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乳腺癌是严重威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之一，其远端转移是导致临床病人死亡的主要原因。乳腺癌细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions，EMT)可能与肿瘤的侵袭转移密切相关。血小板膜糖蛋白Ibα（glycoprotein Ibα，GPIbα）本是特异表达于巨核细胞系的一种血小板膜糖蛋白，在血小板粘附及血栓过程中发挥重要作用。但近年来研究发现，在多种肿瘤细胞均发现有GPIbα的异位表达，且GPIbα在肿瘤细胞的异位表达可能与肿瘤的侵袭转移有关。前期研究发现GPIbα在人乳腺癌组织有着异位高表达，本课题拟进一步研究GPIbα在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系的异位表达，并进一步探讨瘤源性GPIbα对乳腺癌细胞的粘附、侵袭及转移的影响。
目的：
GPIbα异位表达对乳腺癌侵袭和转移的影响。
方法：
1.检测乳腺癌组织GPIbα的表达情况：采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测乳腺癌组织中GPIbα的表达水平，并分析其表达水平与乳腺癌患者临床资料（年龄、肿瘤大小和有无淋巴结转移）的相关性。2.检测乳腺癌细胞系GPIbα的表达情况：采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、免疫印迹法（western blot,WB）检测侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231、非侵袭性乳腺癌细胞T47D和正常的乳腺上皮细胞系MCF-10A GPIbα的表达情况。
3.质粒转染改变GPIbα表达对乳腺癌侵袭转移及EMT的影响：采用siRNA转染技术分别构建MDA-MB-231GPIbα低表达细胞株和T47D GPIbα高表达细胞株。Werstern Blot检测基质金属蛋白酶(m atrix metalloproteinase，MMPs)MMP-2和MMP-9的表达；Transwell和划痕实验检测乳腺癌细胞侵袭和转移能力；细胞粘附实验检测乳腺癌细胞与人脐静脉内皮细(HUEVC)粘附作用;Werstern Blot检测EMT相关标志分子E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达。
结果：
1.乳腺癌组织GPIbα的表达情况：免疫组织化学结果显示,与癌旁组织和正常乳腺组织相比，GPIbα在乳腺癌组织表达明显升高，阳性率高达70%；且GPIbα的蛋白表达水平与患者的肿瘤大小及淋巴结转移呈现明显正相关。
2.乳腺癌细胞系GPIbα的表达情况：qPCR结果显示，与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比，GPIbαmRNA在T47D和MDA-MB-231表达明显升高，而在MDA-MB-231中表达水平最高；Werstern Blot结果显示在各型细胞株中的蛋白表达水平与其mRNA表达水平相一致，即在正常乳腺上皮细胞MCF-10A中表达最低，在非侵袭性乳腺癌上皮细胞T47D中表达较高，而在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达最高。
3.质粒转染改变GPIbα表达对乳腺癌侵袭转移及EMT的影响：成功构建MDA-MB-231GPIbα低表达细胞株和T47D GPIbα高表达细胞株，T47D高表达组GPIbα表达量约为对照组的4.75倍，MDA-MB-231低表达组GPIbα表达量约为对照组的2.08倍。
在GPIbα高表达的T47D乳腺癌细胞，Transwell和划痕实验结果显示GPIbα高表达的细胞体外迁徙和侵袭能力增强；Werstern Blot结果显示GPIbα高表达的细胞MMP-2和MMP-9表达升高；粘附实验结果显示GPIbα高表达的细胞与HUEVC细胞的粘附能力增强。
在GPIbα敲低的MDA-MB-231乳腺癌细胞，Transwell和划痕实验结果显示，敲低GPIbα的细胞体外迁徙和侵袭能力减弱；Werstern Blot结果显示敲低GPIbα的细胞MMP-2和MMP-9的表达水平降低；粘附实验结果显示敲低GPIbα的细胞与HUEVC细胞的粘附能力减弱。
对GPIbα高表达的T47D乳腺癌细胞EMT的影响：Werstern Blot结果显示促进间质细胞标志分子Vimentin的表达，而抑制上皮细胞标志分子E-cadherin的表达。对GPIbα敲低的MDA-MB-231乳腺癌细胞EMT的影响：Werstern Blot结果显示抑制间质细胞标志分子Vimentin的表达，而促进上皮细胞标志分子E-cadherin的表达。
结论：
1.GPIbα在人乳腺癌组织存在异位高表达，且与乳腺癌肿瘤的大小、是否有淋巴结转移等临床特性呈现明显正相关关系。
2.GPIbα在不同乳腺癌细胞系存在异位表达，且与侵袭能力呈现正相关关系，在侵袭性癌细胞MDA-MB-231呈现高表达。
3.高表达GPIbα促进非侵袭性乳腺癌细胞T47D的迁徙、侵袭和粘附能力，而敲低GPIbα能够抑制侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁徙、侵袭和粘附能力；高表达GPIbα表达可能促进T47D乳腺癌细胞EMT的发生，而敲低GPIbα表达可能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞EMT的发生。
目的：
GPIbα异位表达对乳腺癌侵袭和转移的影响。
方法：
1.检测乳腺癌组织GPIbα的表达情况：采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测乳腺癌组织中GPIbα的表达水平，并分析其表达水平与乳腺癌患者临床资料（年龄、肿瘤大小和有无淋巴结转移）的相关性。2.检测乳腺癌细胞系GPIbα的表达情况：采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、免疫印迹法（western blot,WB）检测侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231、非侵袭性乳腺癌细胞T47D和正常的乳腺上皮细胞系MCF-10A GPIbα的表达情况。
3.质粒转染改变GPIbα表达对乳腺癌侵袭转移及EMT的影响：采用siRNA转染技术分别构建MDA-MB-231GPIbα低表达细胞株和T47D GPIbα高表达细胞株。Werstern Blot检测基质金属蛋白酶(m atrix metalloproteinase，MMPs)MMP-2和MMP-9的表达；Transwell和划痕实验检测乳腺癌细胞侵袭和转移能力；细胞粘附实验检测乳腺癌细胞与人脐静脉内皮细(HUEVC)粘附作用;Werstern Blot检测EMT相关标志分子E-钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的表达。
结果：
1.乳腺癌组织GPIbα的表达情况：免疫组织化学结果显示,与癌旁组织和正常乳腺组织相比，GPIbα在乳腺癌组织表达明显升高，阳性率高达70%；且GPIbα的蛋白表达水平与患者的肿瘤大小及淋巴结转移呈现明显正相关。
2.乳腺癌细胞系GPIbα的表达情况：qPCR结果显示，与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比，GPIbαmRNA在T47D和MDA-MB-231表达明显升高，而在MDA-MB-231中表达水平最高；Werstern Blot结果显示在各型细胞株中的蛋白表达水平与其mRNA表达水平相一致，即在正常乳腺上皮细胞MCF-10A中表达最低，在非侵袭性乳腺癌上皮细胞T47D中表达较高，而在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达最高。
3.质粒转染改变GPIbα表达对乳腺癌侵袭转移及EMT的影响：成功构建MDA-MB-231GPIbα低表达细胞株和T47D GPIbα高表达细胞株，T47D高表达组GPIbα表达量约为对照组的4.75倍，MDA-MB-231低表达组GPIbα表达量约为对照组的2.08倍。
在GPIbα高表达的T47D乳腺癌细胞，Transwell和划痕实验结果显示GPIbα高表达的细胞体外迁徙和侵袭能力增强；Werstern Blot结果显示GPIbα高表达的细胞MMP-2和MMP-9表达升高；粘附实验结果显示GPIbα高表达的细胞与HUEVC细胞的粘附能力增强。
在GPIbα敲低的MDA-MB-231乳腺癌细胞，Transwell和划痕实验结果显示，敲低GPIbα的细胞体外迁徙和侵袭能力减弱；Werstern Blot结果显示敲低GPIbα的细胞MMP-2和MMP-9的表达水平降低；粘附实验结果显示敲低GPIbα的细胞与HUEVC细胞的粘附能力减弱。
对GPIbα高表达的T47D乳腺癌细胞EMT的影响：Werstern Blot结果显示促进间质细胞标志分子Vimentin的表达，而抑制上皮细胞标志分子E-cadherin的表达。对GPIbα敲低的MDA-MB-231乳腺癌细胞EMT的影响：Werstern Blot结果显示抑制间质细胞标志分子Vimentin的表达，而促进上皮细胞标志分子E-cadherin的表达。
结论：
1.GPIbα在人乳腺癌组织存在异位高表达，且与乳腺癌肿瘤的大小、是否有淋巴结转移等临床特性呈现明显正相关关系。
2.GPIbα在不同乳腺癌细胞系存在异位表达，且与侵袭能力呈现正相关关系，在侵袭性癌细胞MDA-MB-231呈现高表达。
3.高表达GPIbα促进非侵袭性乳腺癌细胞T47D的迁徙、侵袭和粘附能力，而敲低GPIbα能够抑制侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁徙、侵袭和粘附能力；高表达GPIbα表达可能促进T47D乳腺癌细胞EMT的发生，而敲低GPIbα表达可能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞EMT的发生。