不同灸法对实验性RA的抗炎效应及其HSP70调控机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:happyhubby
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目的:  本研究在把握艾灸温热刺激特性、HSP70与热刺激和抗炎密切相关的基础上,以针灸理论为指导,直接灸、隔姜灸、温和灸日本大耳白兔“肾俞”、“足三里”治疗实验性RA,围绕滑膜炎症关键病理环节,选择HSP70作为研究切入点,以“艾灸温热刺激—HSP70表达与调控—抗炎效应”为研究主线,运用免疫组化、Western-blot等方法技术,探索不同灸法治疗RA的抗炎作用及其HSP70分子调控机制,进一步深化艾灸治疗RA的原理研究,为临床运用灸法治疗RA提供更丰富的科学依据。  方法:  日本大耳白兔64只,体重2.5±0.25kg,雌雄各半,随机分为空白对照组(简称空白组)、RA模型组(简称模型组)、直接灸治疗组(简称直接灸组)、隔姜灸治疗组(简称隔姜灸组)、温和灸治疗组(简称温和灸组)、直接灸+槲皮素阻断组(简称直+槲组)、隔姜灸+槲皮素阻断组(简称隔+槲组)、温和灸+槲皮素阻断组(简温+槲组),每组8只日本大耳白兔。采用福氏完全佐剂塑造实验性RA模型,并于造模后第7天开始分别用直接灸、隔姜灸、温和灸三种不同方法施灸日本大耳白兔“肾俞”、“足三里”穴各五壮,两侧交替进行,每日一次;6天为一个疗程,共3个疗程。在每个治疗日早晨对各艾灸阻断组日本大耳白兔以槲皮素灌胃200mg/kg,在体阻断HSP70功能。于造模前、造模后第7天、治疗后第7天、第14天、第21天分别用软皮尺测量各组日本大耳白兔左右后肢膝关节周长。于治疗后第21天静脉注射空气处死各组日本大耳白兔,取关节滑膜液、滑膜组织和下丘脑,运用Elisa法检测滑膜液中细胞因子IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8及HSP70含量,用免疫组化法检测滑膜组织NF-κB相关分子表达及HSP70含量,用Western-blot法检测下丘脑HSP70含量。  结果:  1.造模前,各组间日本大耳白兔左、右膝关节周长无显著性差异(P>0.05),具有可比性。造模后第7天,模型组及各艾灸治疗组日本大耳白兔左右膝关节周长均较空白组明显升高(P<0.01),各检测时间点模型组日本大耳白兔左右膝关节周长均明显高于空白组(P<0.01),说明造模成功且炎症持续存在;治疗后第7天、14天、21天,各艾灸治疗组日本大耳白兔左右膝关节周长明显低于模型组(P<0.01),说明三种灸法均有明显抗炎效应;治疗后第21天,各个艾灸组中,隔姜灸组日本大耳白兔左右膝关节周长明显低于温和灸组、直接灸组(P<0.05),抗炎效应更为突出。槲皮素阻断各艾灸组之间无显著性差异。  2.模型组 IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值明显高于空白组(P<0.01);与模型组相比,各艾灸治疗组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值明显降低有显著性差异(P<0.05,P<0.01);各艾灸组中,与温和灸组、直接灸组比较,隔姜灸组 IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值降低明显,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。槲皮素阻断各艾灸组之间IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值无显著性变化。与隔姜灸组比,槲皮素阻断组隔姜灸组IL-1、IL-6、IL-8值明显升高,(P<0.01)有显著性差异。  3.模型组NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明显高于空白组(P<0.01);与模型组相比,各艾灸治疗组NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明显降低有显著性差异(P<0.05, P<0.01);各艾灸组中,与温和灸组、直接灸组比较,隔姜灸组NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值降低明显,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。槲皮素阻断各艾灸组之间NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值无显著性差异。与隔姜灸组比,槲皮素阻断隔姜灸组NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明显升高(P<0.05,P<0.01)。  4.模型组滑膜液HSP70值高于空白组(P<0.01);与模型组相比,各艾灸治疗组滑膜液HSP70值明显增高(P<0.01,P<0.05);与相对应的艾灸组比较,槲皮素阻断各艾灸组滑膜液HSP70值明显降低,有显著性差异(P<0.01)。  5.模型组滑膜组织HSP70值高于空白组(P<0.05);与模型组相比,各艾灸治疗组滑膜组织HSP70值明显增高(P<0.01,P<0.05);与相对应的艾灸组比较,槲皮素阻断各艾灸组滑膜组织HSP70值明显降低,有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。  6.模型组下丘脑HSP70值与空白组比较明显升高(P<0.05);与模型组相比,各艾灸治疗组下丘脑HSP70值明显升高(P<0.01,P<0.05);与相对应的艾灸组比较,各艾灸组下丘脑HSP70无明显差异。  结论:  1.不同灸法均具有明确的抗炎效应,但以隔姜灸作用最为明显,而运用工具药槲皮素可以取消不同灸法之间的抗炎效应差异。  2.不同灸法均可诱导滑膜组织和滑膜液RA模型动物HSP70大量表达,运用槲皮素可在一定程度上抑制HSP70表达,提示HSP70可能在不同灸法的抗炎效应中发挥重要作用。  3.虽然槲皮素可以取消隔姜灸与温和灸、直接灸的抗炎效应差异,但并不能完全取消这三种灸法的抗炎效应,提示隔姜灸突出的抗炎效应可能与 HSP70关系更为密切,但灸法的抗炎效应并不完全依赖于HSP70机制来实现。
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