目的:放射治疗（radiotherapy,RT）作为目前肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）的主要治疗手段之一,在大部分分期较晚、无法接受根治性治疗的HCC患者治疗中取得了可观的成效,但由于周围正常肝组织对RT的耐受性较低,因此在研究HCC患者治疗的过程中,研究调控HCC放射治疗敏感性的相关机制、提高HCC的放射敏感性、增加HCC放射治疗疗效变得尤为重要起来。ADAM9存在于许多种细胞的表面,它是一种锌依赖的跨膜蛋白,目前有多项研究表明它可能和HCC的发生发展有关,但其与HCC放射敏感性的关系尚不明确。本实验通过慢病毒感染两株不同的肝癌细胞使其ADAM9蛋白过表达或低表达、检测经X线照射后各组肝癌细胞自噬相关蛋白的表达变化情况,检测经X线照射后各组肝癌细胞联合自噬激活或抑制剂之前和之后细胞增殖及细胞集落形成的影响,进一步研究和探索了ADAM9与HCC放射敏感性这两者之间有着怎样的联系,为寻找与提高HCC放射治疗敏感性有关的新的分子靶点提供了细胞实验的数据支持。方法:分别在两株不同的肝癌细胞中构建出稳定的ADAM9过表达和敲除的慢病毒载体。将过表达ADAM9的慢病毒载体转染至原本应低表达ADAM9蛋白的肝癌细胞株Huh-7中,并为了与其形成对照构建相应的空载组;同理,将敲除ADAM9的慢病毒载体转染至原本应过表达ADAM9蛋白的肝癌细胞株MHCC97H里,并为了与该细胞组形成对照构建出了和它相对应的空载组。并运用Western blot实验验证用慢病毒包装过表达以及敲除ADAM9蛋白后的两种肝癌细胞株的效果。用6MVX线4Gy照射各组细胞并使用Western blot检测照射后各组细胞自噬相关蛋白LC3及p62的表达变化情况,并进行统计学分析;再将MHCC97H的两组细胞联合自噬激活剂,将Huh-7的两组细胞联合自噬抑制剂,用CCK-8实验检测实验中各组细胞增殖的能力,并用平板克隆实验检测实验中各组细胞集落形成的能力。结果:1.过表达ADAM9的肝癌细胞株Huh-7的ADAM9蛋白表达量相较于它的空载组升高;敲除ADAM9后的肝癌细胞株MHCC97H的ADAM9蛋白表达量相较于它的空载组而言明显降低;2.Western blot验证病毒转染结果显示,敲除ADAM9基因后的MHCC97H细胞株中p62和LC3-I蛋白的表达与空载组相比明显升高,LC3-II蛋白的表达明显降低;过表达ADAM9基因后的Huh-7细胞株与空载组相比,p62和LC3-I蛋白的表达降低,而LC3-II蛋白的表达明显升高;3.CCK-8结果:与空载组作比较,ADAM9蛋白敲除组的肝癌细胞株MHCC97H的细胞增殖明显减少（P<0.05）,加用自噬激活剂后细胞增殖增加（P<0.05）;ADAM9过表达组肝癌细胞株Huh7与空转组相比,ADAM9的细胞增殖明显增多（P<0.05）,与自噬抑制剂联用后细胞增殖减少（P<0.05）;4.平板克隆形成结果:ADAM9蛋白敲除组的克隆形成能力较空载组减弱,联用自噬激活剂后其集落形成增强（P<0.05）;而过表达组的克隆形成能力较空载组增强,联合自噬抑制剂后其集落形成减弱（P<0.05）。结论:ADAM9蛋白能够通过诱导自噬从而降低肝癌细胞的放疗敏感性,ADAM9可能成为增强肝癌放疗敏感性的潜在性靶点。