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背景激活的蛋白激酶C受体(receptor for activated C kinase1, Rack1)是一种胞内衔接蛋白,属于WD40(tryptophan-aspartate repeat, WD40repeat)超家族。Rack1的7个WD40重复序列组成的空间结构含多个蛋白结合位点,使其能够直接或间接地与大量蛋白相互作用而形成复合物。Rack1作为多种激酶和磷酸酶的支架蛋白以及胞内穿梭蛋白,参与复杂的信号通路网络的传导,在细胞增殖、细胞迁移、血管发生、转录和蛋白合成中有重要作用。另外,Rack1在血管发生和很多人类肿瘤中表达水平上调。尽管大量研究发现Rackl通过不同的机制在多种肿瘤中发挥重要作用,然而在非小细胞肺癌中Rackl的功能还鲜有报道。近几十年来,世界各国尤其是发达国家,肺癌的发病率以及死亡率均迅速飙升。肺癌通常被分成两个亚群：小细胞肺癌和非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCL)。 NSCLC是除小细胞肺癌以外的上皮来源的肺癌,包括鳞癌、腺癌和大细胞癌。NSCLC是最为常见的肺癌病理类型,约占肺癌总数的80-85%。 NSCLC发展缓慢,早期诊断难度大,手术治疗的可能性小,迫切需要广泛深入地研究其发生、发展的分子机制,寻找新的药物靶点和早期诊断、判断预后的标志分子。A549非小细胞肺癌细胞系是研究非小细胞肺癌和上皮-间充质转换(epithelial to mesenchymal transition, EMT)的一个常用细胞模型。利用该细胞模型研究Rackl在NSCLC中作用的分子机制,对于NSCLC的早期诊断和判断预后有重要意义。目的探究Rack1在非小细胞肺癌发生和发展中的功能及其分子机制,促进Rack1作为早期的诊断、判断预后的标记分子的应用。方法1.利用现有的腺病毒Cre (Adeno-Cre)气管滴入,活化K-rasG12/D诱导肺腺癌发生的小鼠模型。待小鼠长肿瘤后,分别取肺部肿瘤组织和正常组织,检测Rack1的表达水平。2.利用shRNA慢病毒感染系统在非小细胞肺癌细胞株A549中敲低Rack1并建立稳定细胞系。3.利用内盐法(MTS)、软琼脂克隆形成实验、细胞划痕愈合实验等分别分析了Rack1的稳定敲低对A549细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移能力的影响。4.利用western blot等实验技术检测Rackl的稳定敲低对EMT相关分子的改变,探索Rackl的敲低引起EMT的分子机制。结果1. Rack1在小鼠肺腺癌肿瘤标本中的表达水平明显高于肺正常组织(P<0.05)。2.成功建立Rackl稳定敲低的两支A549细胞及对照细胞,敲低效率分别为46%(shRack1-1)和44%(shRack1-2)。3.在A549细胞中敲低Rack1之后,细胞的增殖能力下降,克隆形成能力下调,迁移能力增强(P<0.05),更容易发生EMT。4. Rack1的敲低引起E-cadherin分子表达水平下调,胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)磷酸化水平升高,转录因子c-Jun分子稳定性升高,AP-1(activator protein-1)活性升高(P<0.05)。