冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）,是最常见的心血管疾病之一,近年来发病率逐年升高,严重危害人类生命健康。目前已知的冠心病危险因素包括肥胖、高血压、血脂异常、糖尿病、遗传因素、年龄和吸烟等。其中,肥胖是高血压、血脂异常和糖尿病等心脏代谢性疾病的病理基础。红花黄色素是活血化瘀中药红花的主要效应物质,由多种水溶性醌式查尔酮碳苷类化合物组成,主要包括羟基红花黄色素A（HSYA）和脱水红花黄色素B,治疗冠心病血瘀证及其危险因素肥胖疗效确切,但其作用机制尚未完全阐明。现代研究显示肠道菌群与冠心病发生发展密切相关。红花传统应用以汤剂煎服为主,故从口服给药途径研究红花黄色素对冠心病血瘀证的效应和作用机制具有十分重要的现实意义。围绕红花黄色素的效应机制问题,一些研究初步考察了红花黄色素类成分的体内外代谢转化过程,提示肠道菌群可能参与了口服红花黄色素的效应过程。然而,该类成分极性较大,口服后在肝脏及胃肠道中容易被代谢和分解,其原型的生物利用度较低。所以,急需开发一种能改善口服吸收,增加其安全性和疗效的口服制剂。基于胆碱的天然深共熔溶剂具有良好的生物相容性,是一种优秀的药物/天然化合物给药载体。因此,本研究基于整合效应和肠道菌群,对红花黄色素治疗冠心病血瘀证开展药效及作用机制研究,为红花黄色素治疗冠心病血瘀证提供科学证据。同时,探究基于胆碱的天然深共熔溶剂作为红花黄色素主要活性物质HSYA给药载体的可行性,并从血清代谢组学层面研究了HSYA与天然深共熔溶剂组成的给药体系的抗肥胖作用机制,以期为红花黄色素论治冠心病血瘀证及其危险因素提供科学依据。本论文共分为三章,各章的研究内容及结果如下:第一章文献研究第一节红花黄色素治疗冠心病及其危险因素研究进展近年来,大量研究表明,红花黄色素可能通过抑制炎症反应、氧化应激、心肌细胞凋亡、血小板聚集和改善内皮细胞等作用机制有效改善冠心病及其危险因素。本节对红花黄色素治疗冠心病及其危险因素的药理作用及作用机制进行系统地综述,以期为红花黄色素的基础研究和临床应用拓展思路。第二节研究思路与方案设计本节旨在说明课题研究思路、论文设计及研究内容的整体框架。围绕红花黄色素及其主要活性物质HSYA,以冠心病血瘀证和肥胖为疾病模型,拟解决以下科学问题:（1）从肠道菌群角度研究红花黄色素治疗冠心病血瘀证的作用机制;（2）考察天然深共熔溶剂作为HSYA药物载体的可行性;（3）阐明HSYA与天然深共熔溶剂组成的给药体系的抗肥胖作用机制,最终为红花黄色素治疗冠心病血瘀证及其危险因素的基础研究提供科学依据。第二章红花黄色素干预冠心病血瘀证的作用评价及对肠道菌群的影响第一节红花黄色素的制备本节利用AB-8大孔吸附树脂分离纯化红花黄色素,该工艺条件能够较好地分离纯化红花黄色素,得到质量均一、含量较高的红花黄色素粉末。同时,建立了高效液相色谱法测定HSYA、脱水红花黄色素B的含量,该方法重复性和稳定性良好、专属性强,可为红花黄色素的质量控制研究提供参考。第二节红花黄色素对冠心病血瘀证大鼠的保护作用研究根据冠心病血瘀证的病理特征（心脉瘀阻）,采用高脂饲料喂养复合冠脉结扎手术诱导的冠心病血瘀证大鼠模型,分成假手术组、模型组、红花黄色素低、中、高剂量组和阿托伐他汀钙组并灌胃给药,以心肌酶谱、炎症指标、血脂和血液流变学等血液分析指标为综合评价参数,通过多指标综合指数法进行效应整合,比较分析红花黄色素对冠心病血瘀证的整体效应。结果表明,红花黄色素能显著降低冠心病血瘀证大鼠心肌酶和血脂水平,抑制炎症反应,改善心肌梗死面积以及肠道屏障完整性。红花黄色素治疗冠心病血瘀证呈现出明显的剂量依赖性,在剂量为100 mg·kg-1时,总药效效应值明显优于其他剂量组(25、50 mg·kg-1)。第三节红花黄色素对冠心病血瘀证大鼠肠道菌群的影响本节通过16S r RNA扩增子测序和PICRUSt 2功能预测技术分析各组大鼠粪便中肠道菌群结构组成和功能。研究结果发现,红花黄色素不但能够调节冠心病血瘀证大鼠肠道菌群的结构组成,而且能够调控肠道菌群中参与糖酵解/糖异生相关基因,进而影响与肠道菌群功能相关的氨基酸代谢、碳水化合物代谢、糖脂代谢和能量代谢等代谢通路。第四节红花黄色素对冠心病血瘀证大鼠菌群源代谢物的影响本节通过UPLC-TQ-MS/MS法测定红花黄色素对冠心病血瘀证大鼠生物样本中菌群源代谢物氨基酸、三甲胺、氧化三甲胺及短链脂肪酸的水平变化。结果发现,红花黄色素能够逆转冠心病血瘀证大鼠氨基酸代谢紊乱和血清氧化三甲胺的水平。重要的是,红花黄色素可能通过调节肠道菌群,增加短链脂肪酸水平和紧密连接蛋白Occludin的表达,改善冠心病血瘀证模型大鼠受损的肠道屏障,有效抑制LPS产生和循环,减轻循环和心肌炎症反应,发挥心脏保护作用。第三章红花黄色素抗肥胖作用评价与代谢组学研究第一节天然深共熔溶剂对红花黄色素体内药代动力学的影响本节探究天然深共熔溶剂90%氯化胆碱-葡萄糖（v/v,90%GCH）是否能够作为红花黄色素主要活性成分HSYA的给药载体。首先,利用药代动力学实验评估水和90%GCH对HSYA口服生物利用度的影响。其次,采用在体原位肠灌流实验,研究水和90%GCH对HSYA肠道吸收的影响。最后,探讨90%GCH增加HSYA口服吸收的可能机制。结果表明,90%GCH增加HSYA在体内的口服生物利用度,相对口服生物利用度为326.08%。进一步在体原位肠灌流分析发现,90%GCH HSYA溶液显著提高了HSYA小肠吸收速率常数,其中空肠吸收速率提高约2.95倍。90%GCH增加HSYA口服吸收的原因可能是90%GCH可保护HSYA不被酶降解,协助HSYA通过黏膜层的运输,并介导HSYA通过肠道黏膜的渗透,从而增加血药浓度,提高HSYA的生物利用度。第二节红花黄色素抗肥胖作用评价本节探究90%GCH HSYA溶液对冠心病重要危险因素肥胖的治疗作用。利用高脂饮食（HFD）诱导的肥胖大鼠模型,评价90%GCH HSYA溶液的抗肥胖作用。结果表明,90%GCH HSYA溶液能有效、安全地减轻肥胖诱导的肝损伤,纠正血脂,改善高脂饮食所致的葡萄糖耐受不良。第三节红花黄色素对肥胖大鼠血清代谢组学研究本节从血清代谢组学层面探究90%GCH HSYA溶液抗肥胖的作用机制,检测并鉴定潜在的生物标志物和相关的代谢通路。结果表明,给予90%GCH HSYA溶液能够积极逆转HFD组的代谢模式。从血清样本中筛选出219个差异代谢物,其中,芳香族氨基酸及代谢产物显著下调（如酪氨酸、苯丙酮酸、3-甲基吲哚等）。同时,瓜氨酸、鸟氨酸、组氨酸等氨基酸水平降低。血清代谢物谱和通路富集分析表明,90%GCH HSYA溶液可部分恢复HFD诱导的氨基酸代谢紊乱。