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蜈蚣藻药材为蜈蚣藻科植物蜈蚣藻Grateloupia filicina C.Ag.的干燥藻体,具有清热解毒、驱虫等功效。蜈蚣藻的生物活性成分中,多糖是其主要成分,具有抗血管生成,抗病毒,抗细菌等多种活性,而小分子物质的相关研究较少。本文以福建宁德产的蜈蚣藻为试验材料,研究了蜈蚣藻小分子物质的抗癌活性及其化学成分、多糖成分及其抗凝活性,为综合开发利用蜈蚣藻资源提供了基础性研究资料。
本论文通过MTT法,对蜈蚣藻90％乙醇提取物的石油醚萃取部分进行了活性筛选。实验结果表明,石油醚部分在浓度为500μg／ml时,对A549细胞的抑制作用最强,其抑制率达到90％以上。其次,对MDA-MB-468细胞和HepG2细胞的抑制作用也非常强,其抑制率均达到85％以上,并且,石油醚萃取部分的对Hela细胞和MCF-7细胞也有一定的抑制作用,故把石油醚部分作为重点分离对象,研究其化学成分。
应用硅胶、反相硅胶ODS-A、Sephadex LH-20柱色谱对其活性部位进行分离纯化,得到了6个化合物,分别为十六烷酸、3-β-5-烯-胆甾醇、大黄素、24-乙酰泽泻醇A、25-脱水泽泻醇A、泽泻醇A,均为首次从该植物中分离得到。
本论文通过单因素和正交试验优化了蜈蚣藻粗多糖的提取条件,确定了蜈蚣藻粗多糖的实验室最佳提取条件为:温度100℃,提取时间2h,提取3次。该条件下蜈蚣藻多糖的得率为52.1％,多糖含量为66％。
蜈蚣藻粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow凝胶色谱柱层析分离得到蜈蚣藻多糖的3个组分GFP05、GFP08和GFP15,再经过Scpharosc CL-6B葡聚糖凝胶柱对蜈蚣藻粗多糖进行纯化,得到GFP05、GFP08和GFP15的精制品,3个组分经高效液相色谱检测,呈单一对称峰,表明均为均一组分。
采用了还原水解法测定GFP05、GFP08和GFP15的单糖组成、硫酸钡比浊法测定硫酸基含量、HPGPC测定其分子量,验证3个均一组分与前期研究组分是否一致。研究结果表明,本实验分离纯化得到的3个均一组分的GFP05、GFP08和GFP15分子量依次为:6.6×104、8.41×104和1.26×105,其单糖组成和硫酸基含量与前期结果基本一致,证明该组分均为所需组分。
本论文对蜈蚣藻粗多糖及其各均一多糖GFP05、GFP08和GFP15的抗凝活性做了初步研究。研究结果显示,蜈蚣藻粗多糖及其均一多糖GFP05、GFP08和GFP15都能够延长凝血时间CT；有明显抑制小鼠尾静脉血栓形成的作用(P<0.001)；对凝血指标(凝血酶原时间PT、部分凝血活酶时间APT、凝血酶时间TT、纤维蛋白原Fbg)有一定的影响。