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羧胺三唑(Carboxyamido-triazole，CAI)是我们实验室目前正在研究开发的一个国家一类抗肿瘤新药，该药现已进入临床试验研究阶段。从已经发表的研究结果看，羧胺三唑能够抑制内皮细胞和多种肿瘤细胞系的增殖；抑制鸡胚绒毛尿囊膜模型和大鼠动脉环模型血管的生成；抑制多种动物移植肿瘤模型的生长和转移；抑制bFGF、VEGF、TG等引起的胞内钙水平的升高。 但是，到目前为止，羧胺三唑抑制细胞增殖的机理还不清楚。因此，我们的研究目的就是要在分子和细胞水平上初步阐明羧胺三唑抑制细胞增殖的机制。我们的研究主要集中在以下两个方面： 1．羧胺三唑对SH-SY5Y细胞增殖、凋亡以及细胞周期调控的影响； 2．羧胺三唑对cAMP信号传导通路的影响以及forskolin和茶碱等能够升高胞内cAMP水平的药物对羧胺三唑抗肿瘤细胞增殖效应的影响； 本研究中采用的实验方法： 1．本研究采用细胞生长曲线、WST-8、[~3H]-胸腺嘧啶掺入等实验来检测羧胺三唑对SH-SY5Y细胞增殖、细胞活力以及DNA合成的抑制效应；采用碘化丙啶染色流式细胞术技术检测羧胺三唑对SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期调控的影响；采用台盼蓝拒染实验检测羧胺三唑对SH-SY5Y细胞死亡的诱导效应；采用Western blot实验检测羧胺三唑长期孵育对细胞周期调控蛋白RB的表达以及磷酸化水平的影响；采用Rhodamine 123染色，流式细胞术技术检测羧胺三唑长期孵育对线粒体膜电势的影响；采用INT还原法检测羧胺三唑急性和长期给药对线粒体琥珀酸脱氢酶活性的影响。 2．对于羧胺三唑对cAMP信号传导通路的影响以及forskolin和茶碱等能够升高胞内cAMP水平的药物对羧胺三唑抗肿瘤效应的影响，本研究采用蛋白竞争结合法检测羧胺三唑对腺苷酸环化酶活性的急性作用以及长期作用；采用细胞计数法检测forskolin、茶碱和IBMX等能够升高胞内cAMP水平的药物对羧胺三唑抑制肿瘤细胞增殖效应的影响；采用碘化丙啶染色流式细胞术技术检测forskolin、8-CPT-cAMP和羧胺三唑合用对SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期调控的影响。