目的:检测Icariin(ICA)通过非核效应激活ERK磷酸化促进成骨细胞增殖的作用机制,阐明调节ICA的非核效应作用促进OB增殖的机制,并探讨两者之间的关系。有望为从Icariin中发现抗骨质疏松的新治疗靶标提供参考。方法:通过酶消化法从新生大鼠颅骨提取OB进行体外培养,通过碱性磷酸酶(ALP)染色以及钙结节染色法分析其表面标志的方法鉴定OB。将ICA与BSA进行偶联,ICA-BSA偶联物用于干预OB。将成骨细胞分为A组(ICA干预组)、B组(ICA-BSA干预组)、C组(ICI182780+Icariin-BSA 干预组)、D 组(PD98059+Icariin-BSA 干预组)。实验用四甲基偶氮哩盐比色法(MTT)及细胞流式检测各组药物对成骨细胞快速增殖的影响。采用Western Blot方法检测成骨细胞中ERK的磷酸化程度。在荧光共聚焦显微镜下动态观测细胞内钙离子浓度改变的影响。结果:使用紫外-可见吸收光谱扫描ICA、BSA、ICA-BSA溶液,ICA-BSA溶液吸光度曲线的峰值较ICA、BSA发生了明显变化,这说明在分子之间发生了能量转移,即ICA与BSA反应形成偶联物。液相质谱法证明了偶联物的不渗透性。流式细胞术以及MTT的结果都说明,ICA-BSA对成骨细胞进入有丝分裂具有促进作用,因此对于成骨细胞的增殖起到了促进作用。这种作用可以被雌激素受体拮抗剂ICI 182780和MEK1PD98059通路抑制剂抑制,这表明在成骨细胞中,ICA的非核作用与ER和MAPK信号传导途径有关。Western Blot检测到ICA-BSA组中ERK的表达水平较高,而两组提前使用MEK1的特异性抑制剂PD98059和特异性雌激素受体拮抗剂ICI 182780进行处理的样本对ERK的表达水平明显起到了抑制的作用。通过共聚焦激光测量成骨细胞中的游离钙,在ICA-BSA药物干预后30秒内,细胞内荧光强度明显高于其他组,表明存在非核效应。结论:不透膜的ICA-BSA对成骨细胞内的ERK的快速磷酸化起到激活作用,同时还能够提高细胞内钙的含量以及促进成骨细胞的增殖。而雌激素受体拮抗剂ICI 182780和MEK1特异性抑制剂PD98059则有可能会影响ICA-BSA对成骨细胞的作用,起到抑制效果。因此可以推断出,雌激素受体介导了 Icariin的这种非核作用,MAPK信号通路在这一过程中起到了至关重要的作用。