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背景:非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已为全球最常见的肝脏疾病,约20%的患者可能进展为脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH),后者有发生肝纤维化、肝硬化及肝癌的风险,NAFLD已成为危及患者生命的社会健康问题。NAFLD的相关机制包括,经典的“二次打击”理论学说,即脂肪沉积和炎症浸润的共同作用进一步导致NASH的疾病进展;另外还有近期成为热点的“肠-肝轴”理论学说,即肠道的菌群紊乱等问题导致了肝脏脂肪变的加重。然而,不管哪种学说的发病机制仍未清楚,特别是NASH的早期炎症发病机制是目前研究的热点,同时临床上仍缺乏特异而疗效显著的治疗药物,如何选择合适的药物进行早期干预和治疗也至关重要。NLRP3 炎症小体(NLRP3 inflammasome)主要由 NLRP3、ASC 和Caspase-1三组分组成,在非酒精性脂肪肝的早期炎症发病及疾病进展中起重要作用。本研究拟通过NLRP3炎症小体作为研究点,了解其在肝脏和肠道的机制,旨在发掘NLRP3炎症小体在NASH疾病早期的作用,以及使用贞术调脂中药复方(FTZ)以此作为靶点的疗效作用。方法:第一部分:细胞实验使用棕榈酸(PA)刺激肝脏HSCs细胞,通过免疫荧光检测其对NLRP3炎症小体的结合和激活作用,使用WB和ELISA检测活化的Caspase-1和IL-1 β表达情况,通过ORO染色和使用外源性HMGB1及抑制剂观察细胞脂滴沉积作用。使用ESR检测氧自由基的释放,了解NLRP3炎症小体的上游ROS通路。第二部分:C57BL/6J(WT)小鼠予高脂饮食(HFD)和普通饮食(ND),并部分使用FTZ灌胃处理,进一步通过小鼠体内实验了解NLRP3炎症小体在NASH早期的作用和FTZ抑制效果。第三部分:使用HFD对炎症小体缺陷小鼠(ASC-/-)肠道黏膜的损伤,通过16S rDNA测序检测其对肠道菌群的影响,通过IHC和免疫荧光方法了解HGMB1在肠道黏膜的表达,使用NanoSight观察肠源性外泌体的情况,并使用WB方法了解其中HMGB1的含量。结果:第一部分:PA可以增加肝脏HSCs细胞中NLRP3炎症小体的形成和激活,并增加了活化caspase-1和IL-1β的表达,通过Nlrp3 siRNA基因沉默可逆转这一效应。高脂状态可诱导HSCs细胞膜中的脂筏-氧化还原信号平台形成,进而产生大量02-,并随之促进NLRP3炎症小体的形成与激活。使用外源性的HMGB1可导致脂质沉积作用。第二部分:HFD可诱发小鼠肝脏中NLRP3炎症小体的形成、活化,产生炎症反应和脂质沉积,活化的caspase-1和IL-1β、IL-18表达增加。而通过FTZ处理后小鼠肝脏中NLRP3炎症小体则激活减少。肝纤维化的标志物(α-SMA和vimentin)与Caspase-1活化成分共显影增加,提示NLRP3炎症小体参与肝纤维化早期的形成,使用FTZ能改善该作用。第三部分:使用HFD喂养的ASC-/-小鼠,肠道黏膜损伤和肝脂肪变性加重,并发生肠道菌群的紊乱、Firmicutes:Bacteroidetes ratio和链霉菌的异常增加,肠道黏膜HMGB1表达升高。HFD诱发肠源性外泌体分泌增加,而ASC-/-小鼠的HMGB1在其中含量升高。结论:高脂可通过ROS通路促使肝脏细胞中NLRP3炎症小体激活,具有炎症和脂毒性作用,并与早期肝脏纤维化的发生密切相关。FTZ提取物通过抑制NLRP3炎性小体的活化起治疗作用。炎症小体在肠道黏膜的缺陷可导致菌群失调、肠道黏膜损伤,导致具有脂毒性的肠源性的外泌体增加,并加重了肝脂肪变。