【摘 要】
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目的研究肝吸虫感染所致的肝纤维化中NK细胞的作用变化,深入了解肝吸虫对宿主免疫反应的调节机制,为抗肝吸虫所致的肝纤维化的治疗提供新思路。方法将100只BALB/c小鼠随机分为2组:实验组小鼠给予肝吸虫囊蚴灌胃感染,对照组小鼠给予灌胃等量生理盐水。在感染后第1w、4w、7w,10w和14w处死小鼠,无菌分离小鼠肝脏、脾脏和外周血。观察BALB/c小鼠肝脏和脾脏的形态学变化。Masson染色法观察小鼠
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目的研究肝吸虫感染所致的肝纤维化中NK细胞的作用变化,深入了解肝吸虫对宿主免疫反应的调节机制,为抗肝吸虫所致的肝纤维化的治疗提供新思路。方法将100只BALB/c小鼠随机分为2组:实验组小鼠给予肝吸虫囊蚴灌胃感染,对照组小鼠给予灌胃等量生理盐水。在感染后第1w、4w、7w,10w和14w处死小鼠,无菌分离小鼠肝脏、脾脏和外周血。观察BALB/c小鼠肝脏和脾脏的形态学变化。Masson染色法观察小鼠肝损伤与纤维化程度。分别从肝脏、脾脏和外周血中分离淋巴细胞,应用流式细胞术检测肝脏、脾脏及外周血中NK细胞的比例;流式细胞术分析NK细胞受体NKG2D、NKG2A、NKP46、Ly49A和效应分子Perforin、IFN-γ、TRAIL、Granzyme-B的表达。肝吸虫囊蚴灌胃感染新西兰大白兔,6周后处死大白兔,摘取肝脏,分离肝吸虫成虫,提取肝吸虫成虫总蛋白,用于刺激NK-92细胞,在刺激后12h、24h、36h观察细胞生长状态;qRT-PCR 测定 NK-92 细胞受体 NKG2D、NKG2A,效应分子 Perforin、IFN-γ和粘附分子CD2、CD58、CD54的mRNA表达水平;应用流式细胞术检测NK-92细胞的凋亡情况。结果肝吸虫囊蚴感染BALB/c小鼠后,随着感染时间的延长肝脏逐渐出现明显的炎症和纤维化,尤其在感染第4w和7w以后。流式细胞术结果显示实验组小鼠肝脏NK细胞比例在感染第1w后明显低于对照组,而在第4w及以后均恢复正常水平;与之相反,外周血中NK细胞的比例在感染1w后明显高于对照组,在4w及以后均降至对照组水平;脾脏中NK细胞的比例与对照组相比无显著性差异。对NK细胞受体分析发现,NKG2D和Ly49A均在第1w降低,其后升高,14w以后降至正常水平;NKG2A在4w和7w升高,10w后恢复正常;NKP46在所有检测的受体中表达比率最高,但其从4w后表达下降。效应分子IFN-γ在感染后1w和4w明显升高,在7w降至正常;Granzyme-B与对照组相比无显著性差异;Perforin随感染时间延长表达逐渐降低,而TRAIL则随感染时间延长逐渐呈上升趋势。肝吸虫成虫总蛋白刺激NK-92细胞后,NK-92细胞不再呈现聚团生长,而呈现散开状态,且生长缓慢。进一步研究发现,蛋白刺激后,NK-92细胞发生明显的凋亡,且粘附分子CD2、CD54和CD58的mRNA表达水平降低;激活性受体NKG2D和抑制性受体NKG2A表达下降;效应分子IFN-γ和Perforin表达均降低。结论肝吸虫感染的早期肝脏NK细胞功能即被抑制,后期逐渐恢复正常;肝吸虫抗原可以促进NK细胞凋亡,并通过调控其粘附分子、受体和效应分子的表达抑制其功能。
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