枇杷高频率体胚发生体系的建立及其遗传转化初步研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 29次 | 上传用户:reato
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本试验以枇杷3个品种“解放钟”、“长红3号”和“早钟6号”幼胚、成熟胚、胚根为外植体,通过对枇杷体胚发生再生系统进行较为全面的研究,建立了高频率的枇杷体胚发生和植株再生体系,并对根癌农杆菌感染枇杷胚性愈伤组织(EC)进行初步研究。主要研究结果如下: 1.通过幼胚培养诱导出C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7等多种类型愈伤组织,在继代培养过程中,还从“早钟6号”品种幼胚来源的C3型愈伤组织筛选到强胚性的C8类型EC;采用附加1mg/L2,4-D、0.25mg/L KT的MS培养基与附加1mg/L2,4-D、0.25mg/L KT和5mg/L AgNO3的MS培养基交替暗培养,可长期保持枇杷愈伤组织胚性1年以上。 2.建立了枇杷高频率体胚发生与再生技术体系。采用附加0.25mg/LKT和2%蔗糖的培养基暗培养诱导EC,诱导率可达100%;枇杷形态正常子叶体胚在附加1mg/LKT,50g/L蔗糖的MS培养基经过3个月成熟培养后,转入含20g/L蔗糖、1mg/LKT和0.1mg/LNAA的MS萌发培养基上光照培养,结果表明无论是与愈伤组织粘连的子叶胚丛还是脱离了愈伤组织的单个子叶胚,都可以正常萌发长成具有正常根茎叶结构的植株。子叶形胚丛萌发率可达90%以上,成苗率可达80%以上;单个子叶胚萌发率可达75%左右,成苗率可达60%左右。 3.对枇杷成熟胚和胚根体胚发生进行研究。采用附加1mg/L2,4-D,0.5mg/LKT或BA的MS培养基都可以诱导成熟胚和胚根产生愈伤组织,但成熟胚来源的愈伤组织无体胚分化能力,胚根来源的愈伤组织在附加KT的培养基可以分化体胚;将子叶切段或胚根在附加1mg/L2,4-D和0.5mg/LKT的MS培养基上预培养15天后,转移到去除2,4-D,附加0.25mg/LKT的培养基上培养,成熟胚子叶基部与胚根都可以直接方式体胚发生,其诱导率分别为8.6%和5.6%。 4.通过两种途径研究了枇杷体胚的继代增殖情况,建立了枇杷体胚继代增殖体系。 结果表明,与愈伤组织粘连的子叶形胚丛在原分化培养基上继代,可以在子叶形胚基部、胚轴或表面长出次生胚;将早期子叶形胚在附加0.25~0.5mg/L2,4-D和0.25~0.5mg/LKT的培养基上可以直接诱导出C8类型EC,该类型EC在分化培养基上又可以诱导体胚再生。 5.对枇杷体胚苗茎段增殖进行研究。研究表明,茎切段上端难生长;茎段培养存在直接方式与间接方式两种体胚发生方式。KT或BA都能使茎段直接体胚发生。切段在附加1mg/L2,4-D和0.5mg/LKT的MS培养基上培养,可直接获得C8类型EC。
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