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背景与目的
冠状动脉心脏病(coronaryarterydisease,CAD)是全球的主要死亡原因之一,在我国CAD的患病率为10.2‰。CAD的病因包括遗传因素和环境因素,前者占40%-60%,但遗传因素导致CAD的机制尚不明确。深入了解与其有关的机制可为研发新的防治方法提供理论基础。目前通过全基因组关联分析(genome-wideassociationstudy,GWAS方法已经发现了163个与CAD关联的基因位点。第13号染色体短臂1区2带(13q12)是其中的一个。GWAS发现该位点的单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism,SNP)rs9319428与CAD有明显关联。rs9319428位于编码血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)的FLT1基因的一个内含子里,并和位于转录活跃区域的两个SNP(rs9508025和rs9508026)存在连锁不平衡。本研究的主要目的是了解该位点SNPs影响CAD易感性的可能机制。
材料与方法
收集来自汕头大学医学院第一附属医院行冠脉造影术的患者的动脉血液作为研究样本。对血液样本提取DNA后用TaqMan探针法进行SNPrs9319428、rs9508025的基因分型;提取RNA后用实时定量PCR技术测定单核趋化蛋白1(MCP1)基因表达水平;对新鲜全血进行流式细胞分析术测定单核细胞表面VEGFR1表达;对血浆样本用酶联免疫吸附试验方法测定可溶型VEGFR1和MCP1的浓度;内皮细胞培养后提取核蛋白进行凝胶电泳迁移实验检测不同基因型与核蛋白亲和力;在英国伦敦大学实验室对动脉粥样硬化斑块进行免疫组化测定其巨噬细胞水平;在英国莱斯特大学实验室进行双荧光素酶报告基因实验检测SNP的不同基因型的转录活性差异。
结果
对rs9319428和rs9508025的基因分型结果和冠脉病变支数的Logistic回归分析显示rs9319428的A/A基因型及rs9508025的G/G基因型患者发生多支冠脉病变的概率明显增高。免疫组化实验结果显示rs9319328为A/A型的斑块的巨噬细胞/平滑肌细胞比值高于G/G型的斑块。流式细胞分析的结果表明rs9508025为G/G型及rs9508026为T/T型的单核细胞表面VEGFR1水平高于C/C型。基因表达结果显示rs9319428为A/A型的MCP1mRNA水平要高于G/G型。酶联免疫吸附试验的结果显示rs9319428的A/A型患者的血浆VEGFR1水平明显高于G/G型;rs9319428的A/A型患者血浆MCP1水平要高于G/G型或A/G型;rs9508025及rs9508026的G/G(T/T)型患者的血浆MCP1水平同样高于C/C(C/C)型。血浆VEGFR1和MCP1水平呈正相关关系。双荧光素酶报告基因结果显示rs9508025的G等位基因的序列较其C等位基因具有更高的促进报告基因转录的活性;而rs9508026的T等位基因的序列的活性高于其C等位基因。凝胶电泳迁移实验结果显示rs9508025的G等位基因较C等位基因更易于与核蛋白结合。
结论
本研究的结果提示,与CAD关联的13q12位点中的SNPs有可能通过影响FLT1基因的转录,造成VEGFR1及MCP1水平的个体差异,从而影响单核细胞的迁移,导致动脉粥样硬化进而引起CAD。
水平明显高于G/G型;rs9319428的A/A型患者血浆MCP1水平要高于G/G型或A/G型;rs9508025及rs9508026的G/G(T/T)型患者的血浆MCP1水平同样高于C/C(C/C)型。血浆VEGFR1和MCP1水平呈正相关关系。双荧光素酶报告基因结果显示rs9508025的G等位基因的序列较其C等位基因具有更高的促进报告基因转录的活性;而rs9508026的T等位基因的序列的活性高于其C等位基因。凝胶电泳迁移实验结果显示rs9508025的G等位基因较C等位基因更易于与核蛋白结合。
结论
本研究的结果提示,与CAD关联的13q12位点中的SNPs有可能通过影响FLT1基因的转录,造成VEGFR1及MCP1水平的个体差异,从而影响单核细胞的迁移,导致动脉粥样硬化进而引起CAD。
冠状动脉心脏病(coronaryarterydisease,CAD)是全球的主要死亡原因之一,在我国CAD的患病率为10.2‰。CAD的病因包括遗传因素和环境因素,前者占40%-60%,但遗传因素导致CAD的机制尚不明确。深入了解与其有关的机制可为研发新的防治方法提供理论基础。目前通过全基因组关联分析(genome-wideassociationstudy,GWAS方法已经发现了163个与CAD关联的基因位点。第13号染色体短臂1区2带(13q12)是其中的一个。GWAS发现该位点的单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism,SNP)rs9319428与CAD有明显关联。rs9319428位于编码血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)的FLT1基因的一个内含子里,并和位于转录活跃区域的两个SNP(rs9508025和rs9508026)存在连锁不平衡。本研究的主要目的是了解该位点SNPs影响CAD易感性的可能机制。
材料与方法
收集来自汕头大学医学院第一附属医院行冠脉造影术的患者的动脉血液作为研究样本。对血液样本提取DNA后用TaqMan探针法进行SNPrs9319428、rs9508025的基因分型;提取RNA后用实时定量PCR技术测定单核趋化蛋白1(MCP1)基因表达水平;对新鲜全血进行流式细胞分析术测定单核细胞表面VEGFR1表达;对血浆样本用酶联免疫吸附试验方法测定可溶型VEGFR1和MCP1的浓度;内皮细胞培养后提取核蛋白进行凝胶电泳迁移实验检测不同基因型与核蛋白亲和力;在英国伦敦大学实验室对动脉粥样硬化斑块进行免疫组化测定其巨噬细胞水平;在英国莱斯特大学实验室进行双荧光素酶报告基因实验检测SNP的不同基因型的转录活性差异。
结果
对rs9319428和rs9508025的基因分型结果和冠脉病变支数的Logistic回归分析显示rs9319428的A/A基因型及rs9508025的G/G基因型患者发生多支冠脉病变的概率明显增高。免疫组化实验结果显示rs9319328为A/A型的斑块的巨噬细胞/平滑肌细胞比值高于G/G型的斑块。流式细胞分析的结果表明rs9508025为G/G型及rs9508026为T/T型的单核细胞表面VEGFR1水平高于C/C型。基因表达结果显示rs9319428为A/A型的MCP1mRNA水平要高于G/G型。酶联免疫吸附试验的结果显示rs9319428的A/A型患者的血浆VEGFR1水平明显高于G/G型;rs9319428的A/A型患者血浆MCP1水平要高于G/G型或A/G型;rs9508025及rs9508026的G/G(T/T)型患者的血浆MCP1水平同样高于C/C(C/C)型。血浆VEGFR1和MCP1水平呈正相关关系。双荧光素酶报告基因结果显示rs9508025的G等位基因的序列较其C等位基因具有更高的促进报告基因转录的活性;而rs9508026的T等位基因的序列的活性高于其C等位基因。凝胶电泳迁移实验结果显示rs9508025的G等位基因较C等位基因更易于与核蛋白结合。
结论
本研究的结果提示,与CAD关联的13q12位点中的SNPs有可能通过影响FLT1基因的转录,造成VEGFR1及MCP1水平的个体差异,从而影响单核细胞的迁移,导致动脉粥样硬化进而引起CAD。
水平明显高于G/G型;rs9319428的A/A型患者血浆MCP1水平要高于G/G型或A/G型;rs9508025及rs9508026的G/G(T/T)型患者的血浆MCP1水平同样高于C/C(C/C)型。血浆VEGFR1和MCP1水平呈正相关关系。双荧光素酶报告基因结果显示rs9508025的G等位基因的序列较其C等位基因具有更高的促进报告基因转录的活性;而rs9508026的T等位基因的序列的活性高于其C等位基因。凝胶电泳迁移实验结果显示rs9508025的G等位基因较C等位基因更易于与核蛋白结合。
结论
本研究的结果提示,与CAD关联的13q12位点中的SNPs有可能通过影响FLT1基因的转录,造成VEGFR1及MCP1水平的个体差异,从而影响单核细胞的迁移,导致动脉粥样硬化进而引起CAD。