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非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种发病率较高的慢性肝病,包括单纯性非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic fatty inflammation,NASH)及肝硬化。NAFLD 的发病机制比较复杂,随着“肝-肠轴”学说的提出以及对肠道微生态研究的深入,肠黏膜屏障功能在NAFLD发病中的作用引起重视。研究证实,NAFLD大鼠存在肠黏膜屏障功能受损、肠道菌群结构改变。正常的肠道菌群构成了天然的肠黏膜生物屏障,益生菌能够通过调节肠道菌群改善肠黏膜屏障功能,在NAFLD的治疗中发挥着重要的作用。粪菌移植(Fecal microbiota transplantation,FMT)作为一种特殊的“益生菌”,临床主要用于难辨梭状芽孢杆菌感染性腹泻(Clostridium difficile infection,CDI)的治疗,具有良好的效果。目前上市的益生菌制剂种类繁多,但每种制剂所含菌群种类较局限,而粪菌移植几乎能包含受体全部的肠道菌群,能够快速恢复正常肠道菌群结构,改善肠黏膜屏障功能,从而达到治疗疾病的目的。因此,我们推测粪菌移植可能对NAFLD及代谢性疾病的治疗具有一定的效果。目的:本研究通过高脂饮食建造NAFLD大鼠模型,探讨粪菌移植对NAFLD大鼠肝脏及肠黏膜屏障的保护作用,为粪菌移植应用于NAFLD及代谢性疾病的治疗提供实验依据。方法:健康雄性SD大鼠30只,体重180±20g,适应性喂养一周后随机分为3组:正常对照组(Control group,C组)10只,给予正常饮食,饲料由河北医科大学动物实验中心提供;高脂模型组(Model group,M组)10只、粪菌移植治疗组(Treatment group,T组)10只,M组及T组均给予高脂饮食(脂肪含量59.8%),饲料原料由河北医科大学动物实验中心提供。喂养12周后,每组各处死2只,苏丹黑B染色观察肝细胞脂肪沉积程度,确定造模成功。造模成功后,T组开始给予粪菌液灌胃2ml/次,隔日一次,粪菌液灌胃的前一天晚上及当天早上均给予奥美拉唑镁肠溶片灌胃(10mg/kg/次),以提高胃内pH值;C组及M组同时给予生理盐水、奥美拉唑灌胃,治疗过程中根据大鼠体重的变化调整灌胃量。于第16周末处死各组大鼠,麻醉状态下腹主动脉取血,测定血浆内毒素(Endotoxin)水平、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)水平;留取肝脏组织标本,苏丹黑B及HE染色观察肝脏病理学变化;取回肠末端肠组织行HE染色及扫描电镜观察肠黏膜结构变化。结果:1喂养12周时造模情况:苏丹黑B染色结果显示M组、T组大鼠肝细胞内可见脂肪沉积,证明造模成功。M组及T组大鼠体重较C组大鼠体重明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);M组和T组大鼠之间体重差异无统计学意义(P>0.05)。2喂养16周时各组大鼠体重变化:M组大鼠的体重较C组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);T组大鼠体重较M组有所下降(P<0.05)。3血液指标变化:M组大鼠血清TG、ALT、AST水平较C组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与M组相比,T组大鼠血清TG、ALT、AST明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。M组大鼠血浆内毒素、血清TNF-α水平较C组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与M组相比,T组大鼠内毒素、TNF-α水平有所下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4肝脏组织病理学变化:1)肝脏苏丹黑B染色:C组大鼠肝脏苏丹黑B染色肝细胞内未见明显蓝黑色脂肪沉积。M大鼠可见肝细胞体积增大,肝细胞内大量蓝黑色脂肪沉积,肝细胞脂肪变较明显。经粪菌移植干预后,T组大鼠肝细胞内脂肪沉积明显减少,脂肪变性程度较M组减轻。2)肝脏HE染色:与C组大鼠相比,M组大鼠肝小叶结构紊乱,肝细胞排列不齐,肝细胞肿大,肝细胞内充满大小不等的脂肪空泡,可见细胞核被挤向一边;经粪菌移植干预后T组大鼠肝细胞肿胀程度减轻,脂肪空泡较少,肝细胞排列较整齐。5肠组织结构变化:1)肠组织HE染色:C组大鼠肠绒毛排列紧密,结构完整;M组肠绒毛变短、稀疏,局部有绒毛脱落;与M组相比,T组肠绒毛轻度水肿,排列较整齐、紧密。2)肠黏膜扫描电镜:C组大鼠肠绒毛呈宽厚的叶片状,排列紧密,表面有深浅不一的裂隙,高倍镜下可见肠微绒毛致密,排列整齐。M组大鼠可见肠绒毛呈扁平状,排列稀疏,绒毛表面裂隙变深,高倍镜下肠微绒毛稀疏,局部有倒伏,微绒毛间有较大的间隙。与M组相比,T组大鼠肠绒毛形态较饱满,排列比较紧密,肠微绒毛排列较整齐,微绒毛之间的间隙变小。结论:1高脂饮食可诱导大鼠发生NAFLD,NAFLD大鼠存在肠黏膜屏障功能受损。2粪菌移植能改善NAFLD大鼠肠黏膜屏障功能,降低肠道通透性。3粪菌移植可以减轻NAFLD大鼠内毒素血症。4粪菌移植可以使NAFLD大鼠体重下降、血脂下降、肝功能改善、肝脏脂肪变减轻。