EGCG联合顺铂抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭及迁移作用的实验研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zzbluebus
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背景:骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是我国现代医学和临床中常见的恶性肿瘤之一,治疗OS的方法主要是手术联合辅助化疗,然而传统的抗癌化疗药物副作用较多且骨肉瘤对化疗药物的多药耐药也限制了化疗药物的临床应用,因此寻找新型低毒性的天然抗肿瘤药物具有重大意义。顺铂(cisplatin,CDDP)为骨肉瘤临床治疗中常用的化疗药物,具有较好的疗效。但是CDDP的副作用较大,最主要的就是肾毒性。茶文化在我国有几千年的文化历史,茶中的主要活性成分为儿茶素,表没食子酸儿茶素没食子酸磷脂(epigallocatechin gallate,EGCG)为儿茶素中的主要活性物质之一,是一类既亲水又亲脂的两性分子,含有多种活性基因,具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等作用,可以与转录生长因子、蛋白激酶、细胞因子和酶等多种分子靶点结合而相互作用,导致癌细胞的凋亡,因此EGCG是一类理想的潜在抗癌药物。已有研究报导EGCG能够通过提高细胞的抗氧化能力达到减少CDDP对细胞的损伤,本实验采用ECGC联合CDDP作用于人骨肉瘤MG-63细胞,初步探讨其对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用及可能产生的影响及相关作用机制。方法:(1)分别采用不同浓度梯度EGCG酯和CDDP单独及联合作用于MG-63细胞,实验分组:空白对照组、EGCG组、CDDP组和EGCG+CDDP联合用药组;(2)倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;(3)CCK-8法检测细胞生长抑制率;(4)Transwell小室法检测细胞侵袭数,划痕实验检测细胞迁移能力;(5)Western blot检测相关蛋白Bax、Bcl-2、Bcl-x L、MMP-2、MMP-9、Caspase-3、cleaved Caspase-3表达情况。结果:(1)显微镜下可见空白对照组MG-63细胞呈梭形、生长均匀、活力较好,其他不同浓度实验组细胞形态不一、数量减少,可见不同数量细胞脱落,贴壁细胞密度降低,细胞形态变圆变小,其中EGCG+CDDP联合用药组较单药组坏死细胞数量最多,且上述现象呈时间、药物浓度依赖性;(2)CCK-8法结果表明不同浓度的EGCG及CDDP均能不同程度抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖,造成细胞活力下降,随着药物浓度的增加对细胞的抑制作用愈加明显,联合用药组对MG-63细胞生长抑制作用更强(P<0.05);(3)Transwell小室法显示EGCG组及CDDP组穿过小室膜细胞数均减少,MG-63细胞侵袭能力减弱;联合用药组穿过小室膜细胞数减少更为显著,作用更明显;细胞划痕实验表明EGCG组及CDDP组MG-63细胞迁移能力均下降,联合用药组细胞迁移能力减弱更为显著,表明EGCG联合CDDP能有效抑制骨肉瘤MG-63细胞迁移与侵袭能力(P<0.05);(4)Western blot结果表明用药后Bcl-2、Bcl-x L、MMP-2及MMP-9表达水平明显下调,Bax、Caspase-3、cleaved Caspase-3水平明显上调,与单药应用相比,联合用药组MG-63细胞抑制比例最高,其相关蛋白表达量上调/下调最明显。结论:EGCG能够抑制骨肉瘤MG-63细胞生长,联合CDDP能有效协同抑制其增殖、侵袭及迁移能力,并诱导细胞凋亡发生,可能是通过上调Bax、Caspase-3、cleaved Caspase-3及下调Bcl-2、Bcl-x L、MMP-2、MMP-9的表达实现抑制MG-63细胞生长。本研究结果为骨肉瘤的临床治疗提供了新的理论依据。
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