适体生物传感器检测凝血酶及肿瘤细胞

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肿瘤是目前人类健康的最大威胁之一,随着人类生存环境的恶化,这种威胁呈上升趋势。现代肿瘤学认为恶性肿瘤是一种全身性的疾病,我国恶性肿瘤居死亡原凶的第二位。肿瘤标志物自1965年应用于临床以来,为肿瘤诊断、预后或治疗监测等提供有效信息。近年来,有关肿瘤细胞和肿瘤标志物的检测方法研究已经成为肿瘤防治的热点课题之一。本论文主要研究了基于CdS量子点和适体的新型的电化学生物传感器,其中应用了生物条码技术、纳米金粒子的放大技术和室温下链循环置换放大技术,并且将此传感器应用在凝血酶和肿瘤细胞的分析检测当中,取得了较理想的结果。本论文所设计的三种传感器如下:1.基于适体和生物条码探针的概念设计了一种用于检测凝血酶的电化学生物传感器。其包括金电极的沉积金膜修饰、巯基修饰的DNA在金电极上的捕获、生物条码探针与巯基修饰的DNA的杂交,凝血酶与其适体的特异性结合。通过CdS量子点的标记和溶出、Cd2+的富集和检测实现对凝血酶的放大检测。此方法的线性检测范围是1.0×10?15 M到1.0×10?11 M。该方法对目标凝血酶的检测限为5.5×10–16 M,说明其具有较高灵敏度。该方法对凝血酶具有很高的特异性识别能力,检测过程中不受其他蛋白质如牛血清白蛋白等存在的干扰。2.基于适体和生物条码探针设计了一种间接检测肿瘤细胞Ramos的电化学生物传感器。其包括适体和条码DNA在纳米金粒子上的修饰以及CdS量子点在条码DNA上的标记。通过Ramos细胞与适体的特异性结合作用,标记有CdS量子点的生物条码探针被从磁珠上释放。通过对CdS量子点溶出、Cd2+的富集和检测实现对Ramos细胞的放大检测。检测Ramos细胞的线性关系范围是1.0×1?02 ~ 1.0×1?05 cells mL-1,由3σ计算得到检测限为67 cells mL-1,说明其具有很好的检测灵敏度。该方法的低的检测限归结于纳米金粒子和生物条码DNA的双重放大作用。3.基于适体和发卡环荧光探针固有的信号转换机制的概念设计了一种检测Ramos细胞的荧光放大检测方法。其包括羧基修饰的磁性微球与氨基修饰的适体(aptamer)的特异性结合,通过对适体的杂交和释放和DNA聚合酶的作用对发卡环进行室温下链循环置换聚合反应,实现对Ramos细胞的放大检测。这种检测方法既具有较快的检测速度,又具有高的检测灵敏度,其检测范围是100 ~ 10 000 cell mL-1,检测到得细胞的最小浓度为100 cell mL-1。
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