高致病性猪繁殖与呼吸综合征（highly pathogenic porcine reproductive andrespiratory syndrome，HP-PRRS），俗称高致病性猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）变异株引起的猪的高度接触性传染病，目前仍没有十分有效的药物和治疗方法。而该病在治疗过程中的高复发率也成为该病防制的重要难题。采用高质量的疫苗进行积极有效的预防接种，仍是该病预防控制最为重要的手段之一。因此，疫苗质量的优劣直接决定着免疫接种的成败。而抗原制备是疫苗制造的首要环节，无疑已是决定疫苗质量的关键因素。目前国内绝大多数动物疫苗的生产，包括高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗仍采用传统的转瓶生产工艺。这种建立在上世纪五、六十年代的落后工艺生产出来的疫苗表现出产品批次间差异大、质量稳定性差、不良反应大、抗原滴度低、免疫效果差等缺陷，大大降低了我国动物疫苗产品的质量，已明显不能满足动物防疫的客观需要。本研究采用细胞生物反应器技术生产PRRS病毒抗原，并对培养过程中的各项技术条件进行优化，从而总结出一套较为合理的生产工艺，为PRRSV的大规模培养提供可靠的参考数据。本课题的研究内容主要包括以下三个方面：第一部分：Marc145-LD1细胞培养特性和HP-PRRSV增殖水平研究。将正常生长的Marc145-LD1细胞分别在克氏瓶和3L转瓶中进行单层培养，观察细胞生长状态。按照一定细胞接种量，分别取24h和72h对细胞计数，计算细胞倍增时间。按常规病毒接种量，确定病毒感染复数（MOI）。研究HP-PRRSV在转瓶中增殖时，病毒滴度随培养时间的变化规律，确定最佳病毒收获时间。第二部分：Marc145-LD1细胞在反应器中培养特性和HP-PRRSV增殖水平研究。应用激流式生物反应器培养Marc145-LD1细胞增殖HP-PRRSV，整个过程采用流加工艺，补充细胞生长和病毒增殖需要的能量物质-葡萄糖（glucose）。研究Marc145-LD1细胞在反应器中生长时，葡萄糖消耗量随培养时间的变化规律，确定最佳病毒接种时间。接种病毒后，研究细胞产毒水平与培养时间的关系，确定最佳病毒收获时间。第三部分：PRRSV检测方法研究。为确保PRRSV的存在，从分子水平上应用RT-PCR技术对病毒GP5基因全序列进行扩增，并对电泳图谱进行分析，以确定培养的病毒为PRRSV。