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近年来肿瘤生物免疫治疗作为手术放疗和化疗外的一种新型治疗方法逐渐被人们认识。基于树突状细胞(Dendritic cells,DC)的抗肿瘤疫苗是研究的热点之一。DC/肿瘤融合细胞疫苗作为一种抗肿瘤治疗方法已进入临床实践阶段,但是肿瘤免疫抑制微环境会阻碍CTL到达肿瘤局部,治疗效果欠佳。因此,提高DC/肿瘤融合细胞疫苗体内的抗肿瘤生物活性具有重要意义。干扰素诱生蛋白-10(Interferon-inducible protein-10,IP-10)是 CXC 类家族趋化因子,其受体为CXCR3+,在巨噬细胞、NK细胞以及Th1细胞中都有表达。IP-10能趋化CXCR3+细胞到肿瘤局部,诱导T细胞介导的抗肿瘤免疫应答。此外IP-10还具有抗肿瘤血管生成的作用。本研究制备出负载mIP-10基因的叶酸(folicacid,FA)修饰壳聚糖(chitosan)纳米粒子将其用于荷肝癌小鼠模型中,以期增强DC/肿瘤融合细胞疫苗在体内的抗肿瘤活性。目的:制备FA-chitosan/mIP-10,研究其增强DC/肿瘤融合细胞疫苗抗肿瘤作用及相关机制。方法:采用复凝聚方法制备FA-chitosan/mIP-10,通过傅里叶红外光谱及凝胶阻滞实验检测FA-chitosan/mIP-10是否构建成功;利用动态光散射仪及扫描电子显微镜对FA-chitosan/mIP-10的粒度及形态进行分析;细胞毒性实验检测纳米粒子对细胞的毒性;细胞吞噬实验验证FA-chitosan对Hepa1-6的靶向性;荧光双染色鉴定融合细胞DC2.4/Hepa1-6是否构建成功。建立C57BL/6小鼠肝癌模型,通过皮下注射的方式用 FA-chitosan/mIP-10 联合 DC2.4/Hepa1-6 融合细胞(Fusioncell,FC)疫苗对荷瘤小鼠进行治疗。按一定的时间间隔测量肿瘤体积大小,绘制肿瘤生长曲线,记录荷瘤小鼠的生存时间。采用流式细胞仪检测小鼠体内骨髓前体抑制细胞(Myeloid-Derived Suppressor Cell,MDSC)以及肿瘤局部CXCR3+CD8+T细胞的频率。酶联免疫斑点分析(Enzyme-Linked Immunospot Assay,ELISPOT)检测细胞分泌干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)的情况,用免疫组化染色检测肿瘤细胞的增殖、凋亡及肿瘤局部IP-10蛋白表达情况,HE染色检测FA-chitosan/mIP-10对小鼠重要器官有无毒性损害。结果:成功制备出 FA-chitosan/mIP-10。FA-chitosan/mIP-10 可以有效靶向肝癌细胞Hepa1-6,使IP-10蛋白在肿瘤局部持续表达。FA-chitosan/mIP-10联合FC融合细胞疫苗能募集大量的CXCR3+CD8+T细胞到肿瘤部位,延长荷瘤鼠的生存时间,明显抑制肿瘤体积的生长,进一步研究发现FA-chitosan/mIP-10联合FC融合细胞疫苗能降低荷瘤鼠脾脏、骨髓及肿瘤局部的MDSC数量,增加分泌IFN-γ阳性T细胞数目,抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡的发生。结论:FA-chitosan/mIP-10能有效增强DC2.4/Hepa1-6融合细胞疫苗抗肝癌效果。