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目的:多发性骨髓瘤是第二常见的血液系统恶性肿瘤,其重要特征是骨髓中高度异质性的克隆性浆细胞增多。研究表明,多发性骨髓瘤总生存率不断提高,欧美等发达国家MM 5年生存率已超过50%[1],我国约30%骨髓瘤患者生存期超过5年,整体中位生存期约33个月[2,3],但临床上患者化疗耐药及肿瘤复发仍是影响患者生存期及生活质量的重要因素。因此,研发更多强效而副作用轻微的药物仍尤为需要。近年来白术内酯Ⅰ在抗肿瘤方面的作用引起了广泛关注,有关肿瘤细胞增殖、凋亡及基因表达等研究越来越深入,但目前尚未发现有关于白术内酯Ⅰ在多发性骨髓瘤方面的报道。本研究旨在观察白术内酯Ⅰ对人多发性骨髓瘤细胞株增殖和凋亡的影响,通过线粒体凋亡通路机制研究,探讨白术内酯Ⅰ能否协同硼替佐米产生抗U266细胞的作用,为白术内酯Ⅰ治疗多发性骨髓瘤提供新的理论参考。方法:1、在U266细胞培养基中加入不同浓度的白术内酯Ⅰ共培养24h、48h和72h,选用CCK-8法检测不同浓度及不同时间点处理后细胞的存活率。在U266细胞培养基中加入不同浓度白术内酯Ⅰ共培养24h,应用Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞技术检测不同浓度的白术内酯Ⅰ预处理细胞后的细胞凋亡表达。2、结合不同浓度白术内酯Ⅰ预处理24h U266细胞的增殖抑制率及IC50值测定,选取白术内酯Ⅰ最佳浓度,按照药物干预组(白术内酯Ⅰ最佳浓度、硼替佐米1Ong/ml、联合用药组及空白组)分别干预U266细胞24h,用Annexin V-FITC/PI染色法观察白术内酯Ⅰ与硼替佐米联合用药的细胞凋亡情况。采用qPCR法测定白术内酯Ⅰ及硼替佐米对U266细胞凋亡通路相关mRNA(Caspase-3、Caspase-9、BAX、BCL-2)表达的影响,最后用Western blot法检测抗凋亡蛋白BCL-2及促凋亡蛋白(Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9及BAX)的表达。探讨白术内酯Ⅰ对U266细胞的促凋亡相关机制研究。3、用qPCR及Western blot方法观察硼替佐米及白术内酯Ⅰ干预24h后U266细胞中IL-6、JAK2及STAT3的mRNA及蛋白表达,观察U266细胞中IL-6、JAK2及STAT3的基因表达改变。结果:1、CCK-8结果显示,随着作用浓度增加和作用时间延长,细胞存活率逐渐下降,白术内酯Ⅰ对U266细胞的抑制作用是呈剂量和时间依赖性。与空白组相比,不同浓度的白术内酯Ⅰ干预24h后,细胞均有不同程度的凋亡。随着白术内酯Ⅰ浓度的增加,细胞凋亡率呈上升趋势,呈剂量依赖性(P=0.0.07,r=0.932)。2、流式细胞术结果显示,与空白组比较,联合用药组与单药组均可显著促进U266细胞凋亡,联合用药组凋亡率显著高于硼替佐米组(P=0.003),随白术内酯Ⅰ作用白术内酯Ⅰ组与硼替佐米组比较无明显差异(P=0.308)。3、qPCR检测结果显示,与空白组相比,联合用药可显著抑制BCL-2、JAK2、STAT3及 IL-6 的 mRNA 水平(P=0.000、P=0.016、P=0.016、P=0.015),上调 BAX、Caspase-3、Caspase-9 的 mRNA 表达量(P=0.000、P=0.000、P=0.000)。4、Western blot方法观察显示,与空白组相比,联合用药组BCL-2、JAK2、STAT3及 IL-6 相对蛋白量显著减少,BAX、Cleaved Caspase-3 及 Cleaved Caspase-9 表达水平明显升高,与qPCR结果一致。结论:1、白术内酯Ⅰ对U266细胞增殖的抑制作用是呈时间和剂量依赖性的,时间:24h抑制作用最弱,72h抑制作用最强;剂量:5 μ g/ml抑制作用最弱,160 μ g/ml抑制作用最强。白术内酯Ⅰ对细胞凋亡的促进作用是呈浓度依赖性的,5 μ g/ml促凋亡作用最弱,160 μg/ml促凋亡作用最强。2、白术内酯Ⅰ能增强硼替佐米对U266细胞的抑制促凋亡作用。3、白术内酯Ⅰ对U266细胞的影响及其与硼替佐米的协同效应机制与调控内源性凋亡途径、下调JAK2/STAT3信号通路中的关键基因IL-6、JAK2、STAT3等表达水平。