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肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRSF)是重要的细胞因子受体同时也是一个古老的蛋白质超家族,研究表明TNFRSF参与炎症反应、细胞凋亡、淋巴细胞内稳态和组织发育等事件,在脊椎动物免疫系统中发挥重要的作用。七鳃鳗作为研究发育进化的模式生物,到目前为止,关于TNFRs在七鳃鳗基因组中含有的数目、蛋白质结构和体内发挥的作用仍然是未知的,为此开展了本文研究。1.利用雷氏七鳃鳗数据库筛选出7个七鳃鳗TNFR成员(L-TNFR1、5、10B、11B、16、21和10-like),通过构建系统发育树、保守的蛋白质结构域、蛋白质基序、同线性和基因结构分析对L-TNFRs成员同其他脊椎动物TNFRs成员从进化角度进行比较。明确了七鳃鳗基因组中TNFRs家族成员在进化分支中处于其他脊椎动物TNFRs成员的外群并且在基因结构和蛋白质结构上是保守的,贯穿从低等脊椎动物到高等脊椎动物的进化过程。研究还发现L-tnfrs邻近基因同其他脊椎动物tnfrs邻近基因相比存在巨大的差异,脊椎动物tnfrs与邻近基因间形成基因连锁关系起始于两栖类或者硬骨鱼类。2.通过绘制热图明确了L-tnfrs基因在不同组织中的含量情况并结合实时定量检测技术检测L-tnfrs基因应答病原菌入侵后在转录水平上的变化。L-tnfrs基因在七鳃鳗肠、鳃和白细胞中含量丰富并且能够对病原菌的入侵产生免疫应答,应答方式与病原菌的种类存在相关性。3.利用分子生物学技术分别构建p ET-32a-L-tnfr10-like和p EGFP-N1-L-tnfr10-like原核表达载体和真核表达载体,分离纯化重组蛋白L-TNFR10-like并制备多克隆抗体。通过体内和体外实验对L-TNFR10-like分子的功能进行了初步探究。体外实验表明L-TNFR10-like特异性高表达于七鳃鳗粒细胞中,同时也高表达于七鳃鳗纵褶和鳃组织血管上皮细胞中,参与免疫防御反应;体内实验表明过表达L-tnfr10-like基因的细胞,细胞活力显著下降且能激活NF-κB转录因子,这与高等脊椎动物TNFR10A/10B成员在功能上存在相似性。本文一方面从进化角度对无颌类脊椎动物七鳃鳗TNFRs成员同有颌类脊椎动物TNFRs成员进行了比较分析,对揭示TNFRs成员在脊椎动物进化中发生的变化提供参考;另一方面从组织分布及功能上对七鳃鳗TNFR成员进行了初探,证明了TNFRs成员在七鳃鳗免疫防御中发挥重要的作用;此外,证实了L-TNFR10-like分子可作为七鳃鳗粒细胞的标记分子并对其在七鳃鳗固有免疫防御中发挥的作用有了初步认识,为将来对其进行深入研究奠定了基础。