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背景:骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）是一种临床上较为普遍的原发性恶性骨肿瘤,较强的侵袭性是青少年和儿童癌症引起死亡的重要原因之一,其发病率与死亡率逐年增加。骨肉瘤患者的发病受多种环境和遗传因素的复杂网络调控,临床早期特异性的诊断标志物的缺乏,导致其确诊时往往发生转移。目前临床上对OS的治疗主要采用早期手术切除原发病病灶以及联合多种化疗药物的联合治疗,但是其治疗过程中的副作用产生的毒性作用现今仍然无法预测和解决,导致OS患者不良预后的产生与生存率的减低。因此,对骨肉瘤的早期发生发展的相关基因以及其分子机制的研究,可为临床患者的早期诊断和靶向用药提供新的理论支撑。随着生物科学技术的不断进步,在恶性肿瘤的靶向分子治疗中,越来越多的癌基因与抑癌基因的研究被用于癌症的早期诊断和良好预后的改善措施之中。TRIM35（Tripartite motif 35）属于三元基序家族蛋白成员之一,其具有高度保守结构域的蛋白质,参与了多种肿瘤的发生发展,其对癌细胞的迁移和侵袭的生物学功能有着重要的作用。本研究主要研究TRIM35在骨肉瘤患者与正常骨组织中的表达情况;TRIM35的表达强度与骨肉瘤临床病理参数之间的关系,以及骨肉瘤患者生存的危险因素的分析;分析TRIM35的表达是否是骨肉瘤患者的独立危险因素;进一步在细胞水平研究TRIM35的表达水平是否通过EMT进程和Wnt/β-catenin通路对人骨肉瘤细胞系143B与Saos-2的迁移与侵袭能力产生影响。方法:1.在2018年10月至2019年12月于延安大学附属医院病理科收集正常骨组织30例和64例骨肿瘤组织的切片以及标本的临床信息。利用免疫组织化学染色技术检测TRIM35骨肉瘤组织中和正常骨组织的表达情况,采用KaplanMeier生存曲线法对骨肉瘤患者的预后进行单因素分析,COX比例风险回归模型中行多因素分析TRIM35对患者预后风险的影响。2.构建TRIM35的过表达质粒载体以及siRNA,分别转染到骨肉瘤细胞Saos-2和143B中,应用qRT-PCR和Western Blot验证转染效率。在143B细胞中沉默TRIM35的表达和Saos-2细胞中过表达TRIM35后,分别应用细胞划痕和Transwell实验检测TRIM35对骨肉瘤细胞侵袭与转移能力的影响。3.通过siRNA沉默TRIM35在骨肉瘤143B细胞中的表达,在骨肉瘤细胞Saos-2转染过表达质粒载体,应用Western Blot检测EMT进程的标志性蛋白及调控EMT进程的关键转录因子,明确TRIM35是否对于EMT进程相关。通过细胞免疫荧光技术进检测各Saos-2细胞的各处理组中β-catenin的表达及定位情况,以此判断TRIM35与Wnt/β-catenin通路有无关联。结果:1.免疫组化结果显示TRIM35在骨肉瘤组织中表达显著升高;骨肉瘤临床病理参数结果分析表明了TRIM35的表达强度与肿瘤大小、复发、内脏转移和术后生存时间显著相关,而与其他因素之间未见明显相关;采用Kaplan-Meier生存曲线法对骨肉瘤患者的预后进行单因素分析结果显示TRIM35的表达强度与患者的预后情况显著相关;COX比例风险回归模型中进行多因素分析表明TRIM35表达强度是影响骨肉瘤患者预后的独立危险因素。2.qRT-PCR和Western Blot检测TRIM35在骨肉瘤细胞Saos-2和143B中显著高表达与正常成骨细胞系h FOB1.19相比;细胞划痕实验中在24h和48h观察时,TRIM35表达沉默时,143B-si TRIM35组的细胞迁移率都显著低于143B cell组和143B-si NC组,TRIM35的过表达时,Saos-2-TRIM35组的细胞迁移率均显著高于Saos-2 cell组和Saos-2-NC组;Transwell试验中,TRIM35的沉默时143Bsi TRIM35组进入下室的细胞数显著低于143B cell组和143B-si NC组,而过表达TRIM35时Saos-2-TRIM35组进入下室的细胞数显著高于Saos-2 cell组和Saos-2-NC组。3.在骨肉瘤细胞Saos-2和143B中分别过表达与敲除TRIM35的表达。qRTPCR和Western Blot实验结果表明:敲低TRIM35的表达能够抑制143B细胞中的EMT进程中的E-cadherin的表达显著上调,而N-cadherin、Vimentin及Zeb1和Snail等均明显下调,抑制了143B细胞中的EMT进程;过表达TRIM35时,Ecadherin显著下调,而N-cadherin、Vimentin及Zeb1和Snail则又都显著上调,Saos-2细胞中过表达TRIM35能够诱导EMT进程的发生。结论:1.TRIM35在骨肉瘤组织中表达显著增高且与临床信息显著相关,表达强度与骨肿瘤的预后显著相关,并可以作为患者预后的独立危险因素。2.TRIM35的低表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,高表达能够促进骨肉瘤细胞的迁移与侵袭。3.骨肉瘤细胞中TRIM35的过表达参与了EMT进程的调控,同时TRIM35能够促使β-catenin向细胞核内转移激活Wnt/β-catenin通路。