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羟基酪醇是橄榄苦苷的水解产物,也是中药丁香叶中的重要活性物质基础。研究发现,羟基酪醇在心脑血管疾病、抗炎、抗病毒及抗癌方面具有积极的治疗作用,受到国内外学者的广泛关注,但其在体内半衰期短,靶向性差,临床应用受到限制。本研究以对乙型肝炎有明确治疗作用的丁香叶中的有效成分羟基酪醇为模型药物,探讨以mPEG-PLGA为载体的中药纳米递药系统构建的可行性。1.采用沉淀法制备纳米粒,以粒径、包封率及载药量为考察指标,采用单因素法和星点设计-效应面法对制备工艺及处方进行优化。确定了HT-NPs最佳处方:F68浓度为0.2%,HT和mPEG-PLGA的药载比为1:2,油水体积比为1 2。工艺验证测得包封率为34.3 1±0.46%,载药量为14.81±0.34%。HT-NPs冻干粉的研究,确定以5%甘露醇作为冻干保护剂,冻干粉外观整洁呈疏松的白色粉末,再分散性良好。2.对所制得的HT-NPs样品进行理化特性表征。透射电镜结果显示,样品的形态圆整,分布均匀。测试结果与ZetasizerNano-ZS90激光粒度分析仪一致,HT-NPs 的粒径及 PDI 值分别为 78.73±2.15nm 和 0.12±0.01,Zeta电位为-23.0±0.81mV。采用动态透析法,考察HT-NPs样品的体外释放行为并进行拟合,结果显示HT-NPs冻干粉的体外释药符合Weibull方程,有一定的缓释作用。3.采用荧光内窥式激光共聚焦成像系统技术,小鼠尾静脉注射FITC-HT-NPs溶液和FITC溶液,探讨HT-NPs细胞内靶向性。结果表明,FITC溶液组干扰较小,而FITC-HT-NPs组,随着时间的延长,纳米粒由细胞外逐渐分布到细胞内,数量亦逐渐增加且呈正相关。实验表明,HT-NPs提高了 HT在肝组织中的分布,更好地起到肝靶向的作用。4.以D-GalN诱导的大鼠急性肝损伤为体内模型,以血清中ALT、AST及肝组织中MDA含量和SOD活力为评价指标,光学显微镜观察HE染色病理切片,探讨HT-NPs的肝保护作用。结果表明,HT-NPs能降低血清中ALT、AST及肝组织中MDA含量,提高肝组织中SOD活力,明显改善肝损伤程度,对D-GalN诱导的大鼠急性肝损伤有显著的保护作用;以HepG2.2.15细胞为体外模型,采用ELISA法检测细胞上清液中HBsAg、HBeAg的水平。结果表明,HT-NPs能抑制HBsAg、HBeAg的分泌,且随着药物浓度的增加和用药时间的延长,其抑制作用明显增强。综上所述,本文以丁香叶中的有效成分羟基酪醇为模型药物,mPEG-PLGA为载体,成功构建了适于包封中药水溶性成分纳米递药系统,并初步探索了水溶性药物的包封及释药规律。首次采用荧光内窥式激光共聚焦成像技术探讨中药纳米递药系统在靶细胞内的递药情况,证实HT-NPs不仅能靶向于肝脏,且能很好的将药物递送到肝细胞内。本文为中药水溶性成分纳米递药系统的研究提供了方法和参考。