基于高效液相色谱、分散液相微萃取及中空纤维细胞捕获技术的党参质量评价

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:snowin11
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:为了探寻党参质量标志物(Q-marker),更加客观地评价党参质量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定和分析党参中的小分子成分含量,采用分散液相微萃取—高效液相色谱法(DLPME-HPLC)富集和测定党参中的党参炔苷和苍术内酯Ⅲ,寻找不同基原、不同规格党参的化学差异标志物;应用中空纤维细胞捕获—高效液相色谱法(HFCF-HPLC)初步筛选党参中的抗炎活性成分,探索党参潜在的生物活性标志物。本文为寻找党参Q-marker,完善党参质量评价体系提供依据。方法:1.在本课题组前期研究基础上,采用HPLC测定了45批不同基原、不同规格党参药材中的4个指标性成分—紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ的含量。应用单因素方差分析(one-way ANOVA)、系统聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)以及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法对不同基原、不同规格党参药材进行比较和质量评价。2.应用DLPME-HPLC对党参中的党参炔苷和苍术内酯Ⅲ进行富集和测定,以甲基三辛基氯化铵(TOMAC)和正丁醇所制备的低共熔溶剂(DES)作为萃取剂,采用单因素设计对萃取条件进行了优化,在最佳条件下进行了方法学考察,对不同基原的17批党参药材中的两个目标分析物进行含量测定和单因素方差分析。将该方法与已发表方法进行比较,说明DLPME-HPLC在党参质量评价中的可行性及优势。3.在初步明确党参甲醇提取物具有抗炎活性的基础上,将种植有RAW264.7细胞的中空纤维作为活性筛选的工具,置于党参甲醇提取液中,对党参中的抗炎活性成分进行初步筛选和捕获,结合高效液相色谱法(HPLC-UV)对成分进行鉴定,初步筛选党参中潜在的生物标志物。结果:1.45批党参药材含量测定结果显示,紫丁香苷的含量为0.0072-0.032 mg/g,党参苷Ⅰ为0.2981-1.5637 mg/g,党参炔苷为0.1287-1.0466 mg/g,苍术内酯Ⅲ为0-0.0840 mg/g。在不同基原党参药材中,不同基原党参中紫丁香苷的含量无统计学差异,党参苷Ⅰ在党参中的含量最高(p<0.05);党参炔苷在素花党参和川党参的含量较高(p<0.05);苍术内酯Ⅲ在党参中的含量最高(p<0.05)。在不同规格党参药材中,紫丁香苷在纹党中的含量最高(p<0.05);党参苷Ⅰ在潞党参中的含量最高(p<0.05);党参炔苷在刀党中的含量最高(p<0.05);苍术内酯Ⅲ在潞党参中的含量最高(p<0.05)。HCA、PCA、OPLS-DA分析结果进一步验证,不同基原、不同规格间党参样品存在差异,可以进行区分。2.基于DES的DLPME-HPLC的最佳实验条件为:萃取剂为TOMAC-正丁醇,摩尔比为1:4、体积为110μL;样品相溶液p H为7;盐浓度为0%;分散剂选择甲醇,体积为300μL;萃取时间为90 s;离心转速为6000 rpm及离心时间为2 min。方法学考察结果显示,党参炔苷的检测限(LOD)和定量限(LOQ)为6×10-4和2×10-3μg/m L,苍术内酯Ⅲ的LOD和LOQ分别为和3×10-3和9×10-3μg/m L,两种目标分析物的平均富集倍数(EF)分别为37和154。党参炔苷和苍术内酯Ⅲ的日内精密度RSD分别为1.5%-5.8%和2.6%-5.2%。日间精密度RSD值为1.2%-6.4%和3.1%-4.7%。平均回收率为87.6%-114.7%,RSD值为1.5%-4.7%。样品含量测定结果显示,党参炔苷的含量为0.204-0.927 mg/g,苍术内酯Ⅲ的含量为0-0.1584 mg/g。党参炔苷在素花党参含量最高(p<0.05),苍术内酯Ⅲ在党参中的含量最高(p<0.05)。相比常见的液液萃取法(LLE),该方法具有更低的LOD和LOQ以及更宽的线性范围的优点。3.HFCF-HPLC的实验条件为:采用聚丙烯中空纤维为细胞种植载体、样品溶液浓度为60 mg/m L。该条件下,以细胞捕获因子(CFF)>1为标准,捕获到的化学成分依次为紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷宁、党参炔苷和苍术内酯Ⅲ。结论:本文对党参中紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ进行多成分含量测定结合化学计量学分析结果显示,这四种小分子成分可作为化学标志物区分和比较不同基原、不同规格党参;基于DES的DLPME-HPLC富集和测定了党参中的党参炔苷和苍术内酯Ⅲ,通过比较两种成分的含量可区分三种不同基原的党参,同时为中药中微量成分的分析测定提供了新思路;应用HFCF-HPLC筛选党参中潜在的抗炎活性成分,为系统分析中药中潜在的生物活性成分提供了一种简便、快捷的体外筛选方法。综上所述,紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷宁、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ可作为党参中的候选质量标志物。
其他文献
目的:评价微创与开放Mc Keown食管切除术治疗食管癌的疗效及患者术后生活质量。方法:回顾性分析2020年09月—2021年11月在我院接受食管癌手术治疗的患者60例,按照不同的手术方式分为微创组(MIE组)和开放组(OE组),MIE组患者行胸腹腔镜联合食管切除颈部食管胃吻合术,OE组行右胸上腹切口食管切除颈部食管胃吻合术,分析两种手术方式的手术时间(d)、术中出血量(ml)、淋巴结清扫数目(个
学位
目的:免疫抑制剂作为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的重要治疗药物备受关注,而白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)作为其中之一在有效性和安全性方面均存在争议。IL-1Ra代表药物有阿那白滞素(anakinra)和卡那单抗(canakinumab)。本研究旨在对IL-1Ra(阿那白滞素/卡那单抗)治疗COVID-19的临床疗效及安全性进行Meta分析,为临床用药提供循证医学证据。方法:通过PubM
学位
目的研究分析心肌桥与冠状动脉粥样硬化形成的关系及心肌桥近段冠状动脉粥样硬化形成的危险因素。方法选取2018年4月至2021年4月就诊于山西省汾阳医院行冠脉造影并诊断为心肌桥的593例患者,对其相关临床资料进行回顾性研究,分析总结心肌桥与冠状动脉粥样硬化形成的关系及与心肌桥近段冠状动脉粥样硬化形成的相关因素,再将心肌桥近段冠状动脉粥样硬化性狭窄作为因变量,将年龄、性别、高血压、糖尿病、高脂血症、静息
学位
目的:1.调查老年慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者认知衰弱现状,并分析其相关影响因素;2.构建老年COPD患者认知衰弱风险预测模型并对其进行验证,为临床医护人员预测老年COPD患者认知衰弱的发生风险、制订护理对策提供指导。方法:采用便利抽样法,于2020年5月—2021年3月选取山西省某三级甲等医院呼吸内科、老年医学科收治
学位
目的:本研究旨在观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者诱导痰嗜酸性粒细胞水平与吸入型糖皮质激素(ICS)治疗反应性的关系,并探讨诱导痰嗜酸性粒细胞水平与外周血嗜酸性粒细胞计数之间的相关性。方法:收集山西省汾阳医院2020年12月至2021年12月确诊为C、D组中重度COPD稳定期患者为研究对象,所有符合纳入及排除标准的COPD患者进行痰诱导检测,根据诱导痰嗜酸性粒细胞(EOS)水平分为A组(E
学位
目的:探讨慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者行内镜鼻窦手术后应用布地奈德混悬液浸润明胶海绵填塞鼻腔不同时长的治疗效果。方法:该前瞻性临床研究共纳入75例行双侧内镜鼻窦手术且完成随访的慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者。术后所有患者的右侧鼻腔填塞浸润2mg(4ml)布地奈德混悬液的明胶海绵(激素侧),左侧鼻腔填塞浸润4ml生理盐水的明胶海绵(盐水侧)。随机将患者分为A、B、C三组,分别行鼻腔填塞2周、3周、4周。于术后4周
学位
目的:探讨替罗非班治疗发病24小时内、超溶栓时间窗(6小时)不同病因的急性缺血性脑卒中患者的有效性及安全性。方法:选择2020年1月至2021年9月期间收治在山西省汾阳医院的发病时间在6-24小时的急性缺血性脑卒中患者122例,按随机分配方式分为试验组(替罗非班+双抗)59例、对照组(双抗)63例;记录患者入院时的一般情况、NIHSS评分、m RS评分在0-2分的例数、治疗后24小时和7天的NIH
学位
目的:丹参麦味颗粒由丹参、麦冬、酒女贞子、制何首乌等20余种药味组成,是应用传统工艺配制的中药复方制剂,临床多年用于治疗“心悸怔忡”效果显著,表现出一定的抑制血管内膜增生(intima hyperplasia,IH)作用,具有良好的开发与应用前景。但目前该制剂尚无有效的质量控制标准,其物质基础及作用机制也不明确。本研究旨在建立丹参麦味颗粒质量控制标准,初步明确药效物质基础,并探究其抑制IH的作用机
学位
目的:运用网状meta分析的方法评价不同浓度、不同容量盐水鼻腔冲洗联合多种药物治疗变应性鼻炎的效果和生活质量。方法计算机检索Pub Med、EMbase、The Cochrane Library、中国知网、万方数据库、维普和中国生物医学文献数据库,搜集单独使用不同浓度、不同容量盐水冲洗鼻腔或联合药物使用治疗变应性鼻炎的随机对照试验,各数据库检索时间为建库--2021年4月。将检索文献导入文献管理软
学位
目的:依据美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration,FDA)规定的患者报告结局(Patient-Reported Outcomes,PROs)量表研制指南,基于现代生物-心理-社会医学模式,编制分化型甲状腺癌(Differentiated Thyroid Cancer,DTC)131I治疗后PROs量表并进行信效度检验,为DTC131I治疗后患者健康相关临床
学位