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背景:新会柑,又名茶枝柑,主产于广东省江门市新会区,其干燥成熟的果皮为著名道地药材广陈皮。据统计,2019年新会当地总产柑果超10万吨,其中,种子产量近2000吨。然而由于其“留皮弃肉”的利用方式,其新会柑种子多为伴随果肉直接丢弃处理,不仅造成环境污染,也造成严重的资源浪费。我国自古就有将柑橘种子作为中药橘核应用的历史,然而,由于目前对橘核的研究较少,导致其应用并不广泛。研究表明,橘核具有镇痛、抗癌及抗感染等药理活性。因此,本文对新会柑种子所含化学成分及其含量进行系统研究,并结合相关药理实验初步探讨其所含化学成分对于人肝癌细胞Hep G2的药理活性作用。以期为合理开发利用新会柑种子资源提供科学依据。目的:(1)分析鉴定新会柑种子所含化学成分;(2)分析测定新会柑种子的含量;(3)分离纯化及制备新会柑种子的主要化学成分;(4)初步探讨新会柑种子的主要化学成分对人肝癌细胞Hep G2的影响。方法:(1)利用超高效液相色谱-四极杆轨道阱质谱技术分别对新会柑种子的甲醇超声提取物和超临界CO2流体萃取物进行分析鉴定,采用高效液相色谱法测定新会柑种子中柠檬苦素、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、辛弗林和没食子酸的含量;(2)采用硅胶柱层析结合重结晶法从新会柑种子中分离制备其主要化学成分,其分子量及结构采用电喷雾电离质谱(Electrospray Ionization Mass Spectrometry,ESI-MS)、核磁共振氢谱(Proton Nuclear Magnetic Resonance,1H-NMR)及碳谱(Proton Nuclear Magnetic Resonance,13C-NMR)进行鉴定;(3)分别采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、细胞克隆形成实验和Hoechst染色实验对经柠檬苦素处理后Hep G2细胞的存活率、细胞克隆形成能力和细胞凋亡率进行检测。结果:(1)利用超高效液相色谱-四极杆轨道阱质谱技术分别对新会柑种子的甲醇提取物和超临界CO2流体萃取物进行鉴定,共鉴定出35个化学成分和28个化学成分;采用高效液相色谱法测得新会柑种子中柠檬苦素、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、辛弗林和没食子酸的平均含量分别为18.989,0.382,0.345,0.312,0.081,0.033和0.003 mg·g-1;(2)通过硅胶柱层析法结合重结晶法从新会柑种子中分离制备得其主要化学成分,经ESI-MS、1H-NMR及13C-NMR鉴定为柠檬苦素;(3)CCK-8实验结果显示,柠檬苦素对Hep G2细胞抑制增殖的作用呈时间及剂量依赖性;(4)Hep G2细胞的克隆形成能力随柠檬苦素浓度的增加而减弱;(5)Hoechst实验结果显示,Hep G2细胞的凋亡程度随柠檬苦素浓度的增加而增加。结论:(1)利用超高效液相色谱-四极杆轨道阱质谱技术能快速有效鉴定新会柑种子的化学成分,其中20个黄酮类化合物为首次从其甲醇提取物中发现,9个酯类化合物为其超临界CO2流体萃取物中首次发现;此外,含量测定结果表明新会柑种子中柠檬苦素含量丰富,可进一步进行分离制备;(2)硅胶柱层析法结合重结晶法可用于新会柑种子中柠檬苦素的分离纯化制备;(3)柠檬苦素对Hep G2细胞具有抑制增殖的作用,且作用效果呈时间及剂量依赖性;(4)柠檬苦素通过诱导Hep G2细胞的凋亡发挥抑制增殖的作用。