目的本研究采用密度梯度离心法分离健康人外周血源DC前体细胞,在rhGM-CSF、rhIL-4等细胞因子的诱导分化培养下促使前体细胞向DC方向分化发育,rhTNF-α刺激24小时促使未成熟DC分化发育为成熟DC,用HepG2及HepG2.2.15细胞上清液制备条件培养基,旨在探讨病毒存在的肿瘤微环境、肿瘤微环境对DC的表型、免疫功能状态影响以及中药枸杞多糖对正常和条件培养基培养的DC表型、免疫功能状态、细胞胞核蛋白NF-κB表达的影响。从免疫抗原递呈细胞、病毒免疫耐受及肿瘤细胞免疫逃逸角度,探讨乙肝相关性肝癌的发生机制和枸杞多糖对体外实验型肝癌以及乙肝相关性肝癌抑制作用的免疫学机制,以期为中医药在原发性肝癌的生物免疫治疗提供科学的理论依据。方法无菌常规采取健康健康志愿者前臂静脉血,肝素抗凝。采用密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,用含10%胎牛血清（fetal calf serum,FCS）的RPMI-1640完全培养基在25ml培养瓶贴壁6小时,去除悬浮淋巴细胞获得DC前体细胞,用含rhGM-CSF、rhIL-4（作用浓度分别为1000U/ml,1000U/ml）的完全培养基进行诱导分化培养;培养收集两种肝癌细胞株（HepG2,HepG2.2.15）培养上清液,按V_肿瘤上清:V_{RPMI1640不完培养基}=1:3制备条件培养基（conditionedmedium,CM）。本研究共分为两个部分,第一部分:空白对照组和实验组,实验组于第0天加入CM_HepG2,CM_HepG2.2.15;第二部分:第一阶段分为4组:空白对照组、实验组:每组各加入浓度为50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的LBP,MTT法确定CMP作用的最佳浓度;第二阶段共分6组:正常对照组,实验组:CM(CM_HepG2,CM_HepG2.2.15)组,CM+LBP组,正常对照+LBP组;未加LBP组于第6天加入TNF-α800μ/ml,倒置显微镜下观察各组细胞形态,流式细胞术检测第7天DC免疫表型CD83、CD86、CD1a、HLA-DR的表达。采用MTT法测MLR,收集各组DC培养上清和MLR上清用ELASA法检测IL-12p70以及IFN-γ含量;收集培养7天的各组细胞,抽提核蛋白,ELASA法定量检测NF-κB的活性。结果1.健康人新鲜外周血单个核细胞在细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α联合诱导培养下,获得大量具有典型形态学特征、高淋巴刺激增殖能力,高表达CD86、CD1a、HLA-DR的DC。2.两种肝癌细胞上清液制备条件培养基培养DC刺激淋巴细胞增殖能力、DC分泌IL-12p70、MLR分泌IFN-γ和DC表面分子标志（CD83、CD86、CD1a、HLA-DR）均显著低于正常培养基培养的DC,差异显著（p＜0.05）,有统计学意义。3.使用HBV存在的肝癌细胞上清制备的条件培养基培养的DC形态、其刺激淋巴细胞增殖的能力、DC分泌IL-12p70、MLR中IFN-γ分泌水平和DC表面分子标志（CD83、CD86、CD1a、HLA-DR）均低于无HBV存在的肝癌细胞上清制备的条件培养基培养的DC,二者之间差异无统计学意义。4.正常环境中加入LBP（100μg/ml）其DC表面分子表型及其刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力、DC分泌IL-12p70的水平、同种异体淋巴细胞反应中IFN-γ的分泌水平均显著高于正常环境中培养的DC,差异显著（p＜0.05）,具有统计学意义。肝癌细胞上清制备的条件培养基中经LBP处理组其DC表面分子表型及同种异体淋巴细胞的刺激能力、DC分泌IL-12p70的水平、同种异体淋巴细胞反应中IFN-γ的分泌水平均显著高于未经处理组中培养的DC,差异显著（p＜0.05）,具有统计学意义。5.条件培养基培养的DC经LBP处理组胞核NF-κB的表达高于未处理组,差异显著（p＜0.05）,具有统计学意义。正常环境中培养的DC胞核NF-κB高于条件培养基中培养的DC差异显著（p＜0.05）,具有统计学意义。加入LBP的两种不同肝癌细胞上清的NF-κB的表达差异无统计意义。结论1.健康人外周血源单个核细胞存在DC前体细胞,在rhGM-CSF、rhIL-4和rhTNF-α的联合作用下可以获得大量成熟DC。2.肿瘤微环境可以抑制DC表面分子的表达、DC分泌IL-12p70的量以及MLR中IFN-γ的分泌量,抑制DC的分化成熟以及胞核蛋白内NF-κB的表达,提示其功能障碍可能与NF-κB信号通路受到抑制有关。3.LBP可以上调肝癌细胞上清及病毒存在的肿瘤微环境培养的DC的表型及胞核蛋白内NF-κB的表达,提示可能与改善NF-κB信号通路表达有关。