【摘 要】
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目的:探讨姜黄素（C）和低频低强度超声（U）单独和联合作用对脑胶质瘤U87细胞增殖的影响,并选择出影响U87细胞增殖的二者联合作用的适宜参数条件。二者联合后进一步分析对U87细胞形态,以及对FOXO3a、p-FOXO3a和MMP-9蛋白表达的影响。最后,检测在U87细胞中FOXO3a、p-FOXO3a是否影响MMP-9的表达。方法:1、采用不同浓度姜黄素（0、5、10、20μmol/l）作用于U8
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目的:探讨姜黄素（C）和低频低强度超声（U）单独和联合作用对脑胶质瘤U87细胞增殖的影响,并选择出影响U87细胞增殖的二者联合作用的适宜参数条件。二者联合后进一步分析对U87细胞形态,以及对FOXO3a、p-FOXO3a和MMP-9蛋白表达的影响。最后,检测在U87细胞中FOXO3a、p-FOXO3a是否影响MMP-9的表达。方法:1、采用不同浓度姜黄素（0、5、10、20μmol/l）作用于U87细胞24h后,用CCK-8法检测其对U87细胞增殖的影响。2、采用不同强度低频超声（0、50.4、83.4、142、290m W/cm~2）,辐照时间60s作用于U87细胞24h后,同样用CCK-8法检测其对U87细胞增殖的影响。3、根据姜黄素和低频低强度超声单独处理组的CCK-8结果,初步筛选出适宜的姜黄素浓度及低频超声强度。最终选取联合组C10U83.4（姜黄素10μmol/l,超声强度83.4m W/cm~2）作用于U87细胞,进行后续实验。4、用倒置万能荧光显微镜观察姜黄素和低频低强度超声单独和联合组（Control、C10、U83.4和C10U83.4）作用于U87细胞24h后,观察对细胞形态的影响。5、采用Western Blotting法检测姜黄素和低频低强度超声单独和联合组（Control、C10、U83.4和C10U83.4）作用于U87细胞24h后,分析对FOXO3a、p-FOXO3a和MMP-9蛋白表达的影响。6、采用Akt抑制剂TIC10（浓度10μmol/l）作用于U87细胞24h后,用Western Blotting法分析TIC10对FOXO3a、p-FOXO3a和MMP-9蛋白表达的影响。结果:1、姜黄素单独作用对U87细胞具有增殖抑制作用,其效应呈明显的剂量依赖性,即随浓度的增加抑制作用增强。当浓度＞5μmol/l（即10、20μmol/l）时,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。2、低频低强度超声单独作用对U87细胞具有增殖抑制作用,其效应呈明显的强度依赖性,即随强度的增加抑制作用增强。当强度＞50.4m W/m~2（即83.4、142和290m W/cm~2）时,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。3、经CCK-8结果分析,最终选取联合组的适宜条件C10U83.4。二者联合后对U87细胞的增殖抑制作用与对照组相比明显增强（P＜0.05）;且二者联合作用强于单独作用（与姜黄素和低频低强度超声单独组比较,均P＜0.05）。4、姜黄素与低频低强度超声单独和联合作用影响U87细胞形态。观察结果表明对照组U87细胞贴壁良好,形态正常,呈梭形,排列密集,生长速度快,甚至会出现部分细胞联络成片状生长的现象,细胞间紧密连接;处理组U87细胞贴壁不牢固,部分细胞形态皱缩变圆,细胞生长缓慢,数量减少,细胞之间间隙扩大,以联合组变化显著。5、姜黄素和低频低强度超声单独和联合作用均能下调U87细胞中FOXO3a、p-FOXO3a和MMP-9蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）;且联合组对p-FOXO3a、MMP-9蛋白表达下调作用显著强于单独组（与姜黄素和低频低强度超声单独组对比,均P＜0.05）,而对FOXO3a蛋白的表达下调作用不明显（P＞0.05）。此外,姜黄素和低频低强度超声单独和联合作用对p-FOXO3a蛋白表达下调作用显著强于对FOXO3a蛋白表达作用。6、Akt抑制剂TIC10（10μmol/l）显著下调FOXO3a、p-FOXO3a蛋白表达的同时,MMP-9的表达也随之下调,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。此外,TIC10对p-FOXO3a蛋白表达下调作用显著强于对FOXO3a蛋白表达作用。结论:姜黄素和低频低强度超声单独和联合作用均能抑制U87细胞的增殖。将两者联合应用后对U87细胞的增殖抑制作用强于两者单独作用。它的机制可能与抑制Akt活性、FOXO3a的磷酸化和降低MMP-9蛋白表达有关。
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