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【目的】
观察芪蛭真武汤是否可以抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体3-半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1-白细胞介素-1β/白细胞介素-18(NLRP3-Caspase-1-IL-1β/IL-18)信号通路,改善单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化。
【方法】
喂养雄性SD大鼠104只,随机抽取20只作为假手术组(A组),仅分离输尿管但不做结扎。84只结扎左侧输尿管,分为模型组24只(B组),芪蛭真武汤高剂量治疗组20只(C组),芪蛭真武汤低剂量治疗组20只(D组),厄贝沙坦治疗组20只(E组)。术后次日给药治疗,术后第3天随机挑选2只大鼠摘取左侧肾脏,HE染色见肾间质增宽,肾小管扩张即判定造模成功。分别在术后1周、2周、3周每组各随机挑选6只取材,腹主动脉采血并分离左侧(梗阻侧)肾脏。观察芪蛭真武汤对实验大鼠肾脏一般形态和病理形态;计算肾脏脏器指数、血清肌酐、尿素氮;免疫组化(IHC-P)观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-I)的表达;WesternBlot观察NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1β因子的表达水平;RT-PCR观察NLRP3和Caspase-1的mRNA表达;ELISA检测IL-18和IL-1β的浓度。
【结果】
1.A组大鼠体重正常速率增长,肾脏呈暗红色蚕豆状,B组体重增长缓慢,肾脏体积明显增大,皮质变薄,内含大量浑浊液体;B组肾脏脏器指数较A组显著增加,且随着时间的延长而加重(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组各时间段的肾脏脏器指数较B组改善明显(P<0.05)。
2.B组大鼠各时间段血清中肌酐和尿素氮较A组显著升高(P<0.01),不同时间段各治疗组有所改善,C组和E组较B组下降(P<0.05,P<0.01),D组比C组升高有统计学意义(P<0.05)。
3.HE染色结果:各时间段A组大鼠未见明显病理改变,B组大鼠肾组织肾间质增宽、水肿,其内存在炎性细胞、纤维细胞,随时间进展而加重。不同时间段的各治疗组较B组有所改善。
4.Masson染色结果:各时间段A组大鼠仅有较少量的蓝色胶原纤维,B组大鼠肾组织肾间质增宽,肾小管扩张,有较多蓝色胶原纤维,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组胶原纤维沉积分数较B组显著下降(P<0.01),D组比C组显著升高(P<0.01),D组比E组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
5.IHC-P结果:与A组相比,各时间段B组大鼠肾组织可见大片棕黄色区域,α-SMA、FN和Col-I蛋白呈强阳性表达(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组下降(P<0.05,P<0.01),D组比C组升高(P<0.05,P<0.01),D组比E组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
6.WesternBlot检测结果:与A组相比,B组大鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。不同时间段各治疗组较B组有所改善,其中C和E组显著下降(P<0.01),D组比C组显著升高(P<0.01)。与E组比较,C组降低(P<0.05,P<0.01),D组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
7.RT-PCR检测结果:与A组相比,B组大鼠肾组织中NLRP3mRNA和Caspase-1mRNA表达结果明显升高(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组下降(P<0.05,P<0.01),D组比C组升高(P<0.05);D组比E组升高有统计学意义(P<0.05)。
8.ELISA检测结果:与A组相比,各时间段B组大鼠血清中IL-18和IL-1β浓度显著升高(P<0.01),各治疗组较B组有所改善,其中C和E组显著下降(P<0.01);D组比C组升高(P<0.05,P<0.01),D组比E组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
【结论】
1.芪蛭真武汤对UUO大鼠具有保护作用,可以降低肌酐、尿素氮,减轻UUO大鼠的肾脏病理损害,缩小其胶原纤维沉积面积,延缓肾间质纤维化进展。
2.芪蛭真武汤可能是通过调控NLRP3炎症小体以及其下游相关分子Caspase-1、IL-18和IL-1β的表达;降低α-SMA、FN和Col-I等因子的含量,减少ECM的沉积和聚集,来延缓肾间质纤维化的进展,其中以芪蛭真武汤高剂量治疗组效果较佳。
观察芪蛭真武汤是否可以抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体3-半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1-白细胞介素-1β/白细胞介素-18(NLRP3-Caspase-1-IL-1β/IL-18)信号通路,改善单侧输尿管梗阻模型肾间质纤维化。
【方法】
喂养雄性SD大鼠104只,随机抽取20只作为假手术组(A组),仅分离输尿管但不做结扎。84只结扎左侧输尿管,分为模型组24只(B组),芪蛭真武汤高剂量治疗组20只(C组),芪蛭真武汤低剂量治疗组20只(D组),厄贝沙坦治疗组20只(E组)。术后次日给药治疗,术后第3天随机挑选2只大鼠摘取左侧肾脏,HE染色见肾间质增宽,肾小管扩张即判定造模成功。分别在术后1周、2周、3周每组各随机挑选6只取材,腹主动脉采血并分离左侧(梗阻侧)肾脏。观察芪蛭真武汤对实验大鼠肾脏一般形态和病理形态;计算肾脏脏器指数、血清肌酐、尿素氮;免疫组化(IHC-P)观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-I)的表达;WesternBlot观察NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1β因子的表达水平;RT-PCR观察NLRP3和Caspase-1的mRNA表达;ELISA检测IL-18和IL-1β的浓度。
【结果】
1.A组大鼠体重正常速率增长,肾脏呈暗红色蚕豆状,B组体重增长缓慢,肾脏体积明显增大,皮质变薄,内含大量浑浊液体;B组肾脏脏器指数较A组显著增加,且随着时间的延长而加重(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组各时间段的肾脏脏器指数较B组改善明显(P<0.05)。
2.B组大鼠各时间段血清中肌酐和尿素氮较A组显著升高(P<0.01),不同时间段各治疗组有所改善,C组和E组较B组下降(P<0.05,P<0.01),D组比C组升高有统计学意义(P<0.05)。
3.HE染色结果:各时间段A组大鼠未见明显病理改变,B组大鼠肾组织肾间质增宽、水肿,其内存在炎性细胞、纤维细胞,随时间进展而加重。不同时间段的各治疗组较B组有所改善。
4.Masson染色结果:各时间段A组大鼠仅有较少量的蓝色胶原纤维,B组大鼠肾组织肾间质增宽,肾小管扩张,有较多蓝色胶原纤维,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组胶原纤维沉积分数较B组显著下降(P<0.01),D组比C组显著升高(P<0.01),D组比E组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
5.IHC-P结果:与A组相比,各时间段B组大鼠肾组织可见大片棕黄色区域,α-SMA、FN和Col-I蛋白呈强阳性表达(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组下降(P<0.05,P<0.01),D组比C组升高(P<0.05,P<0.01),D组比E组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
6.WesternBlot检测结果:与A组相比,B组大鼠肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。不同时间段各治疗组较B组有所改善,其中C和E组显著下降(P<0.01),D组比C组显著升高(P<0.01)。与E组比较,C组降低(P<0.05,P<0.01),D组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
7.RT-PCR检测结果:与A组相比,B组大鼠肾组织中NLRP3mRNA和Caspase-1mRNA表达结果明显升高(P<0.01)。各治疗组较B组有所改善,其中C和E组下降(P<0.05,P<0.01),D组比C组升高(P<0.05);D组比E组升高有统计学意义(P<0.05)。
8.ELISA检测结果:与A组相比,各时间段B组大鼠血清中IL-18和IL-1β浓度显著升高(P<0.01),各治疗组较B组有所改善,其中C和E组显著下降(P<0.01);D组比C组升高(P<0.05,P<0.01),D组比E组升高有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。
【结论】
1.芪蛭真武汤对UUO大鼠具有保护作用,可以降低肌酐、尿素氮,减轻UUO大鼠的肾脏病理损害,缩小其胶原纤维沉积面积,延缓肾间质纤维化进展。
2.芪蛭真武汤可能是通过调控NLRP3炎症小体以及其下游相关分子Caspase-1、IL-18和IL-1β的表达;降低α-SMA、FN和Col-I等因子的含量,减少ECM的沉积和聚集,来延缓肾间质纤维化的进展,其中以芪蛭真武汤高剂量治疗组效果较佳。