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作为Krüppel样转录因子(Krüppel-like factors,KLF)家族成员之一,KLF10具有三个高度保守的Cys2/His2锌指结构,调控着细胞的很多功能。最近有学者在小鼠3T3-L1细胞系中发现KLF10与脂肪细胞分化有关。但在反刍动物尤其是山羊(Capra hircus)上尚未见到相关报道,本实验室前期转录组测序结果表明KLF10可能参加山羊肌内脂肪细胞分化。因此本研究以简州大耳羊为试验动物,利用细胞培养、实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)、Western Blot、过表达、RNA干扰和双荧光素酶报告实验等方法在克隆获得山羊KLF10基因序列的基础上,明确了KLF10对山羊肌内前体脂肪细胞分化的调控作用及阐明了其可能的作用机制。主要获得以下研究成果:(1)成功克隆获得山羊KLF10基因序列1457 bp,包括完整的CDS区1449bp,编码482个氨基酸;筛选并确定了TBP为山羊组织器官中表达最稳定的内参基因,组织表达结果显示KLF10在山羊各组织中存在广泛表达,且在脾和肺中表达水平最高(P<0.01)。(2)在山羊肌内前体脂肪细胞分化过程中,KLF10表达水平总体呈上升趋势;过表达KLF10极显著增加了肌内脂肪细胞中脂滴的积聚;过表达KLF10脂肪细胞分化标志基因C/EBPα表达水平显著上调(P<0.05),LPL和C/EBPβ表达水平显著下调(P<0.05),SREBP1表达水平极显著下调(P<0.01);过表达KLF10后KLF3、KLF14和KLF17的mRNA表达量极显著上调(P<0.01),KLF1和KLF16的mRNA的表达量也被显著上调(P<0.05),而KLF11的表达水平则显著下调(P<0.05)。(3)干扰KLF10后极显著降低了山羊肌内脂肪细胞中脂滴的积聚;同时干扰KLF10后LPL、AP2、C/EBPα和SREBP1表达水平极显著下调(P<0.01),而Pref-1表达水平则被极显著上调(P<0.01);KLF1、KLF5、KLF6、KLF7、KLF8、KLF9、KLF11、KLF12、KLF14、KLF15、KLF16和KLF17的mRNA表达量均受到抑制极显著降低(P<0.01),而KLF3的表达水平则显著上调(P<0.05)。(4)成功克隆得到山羊C/EBPα启动子序列并构建其荧光素酶报告载体,转染至山羊肌内前体脂肪细胞后,检测结果显示KLF10过表达后C/EBPα启动子活性显著增强(P<0.01)。综上所述,本研究克隆获得了山羊KLF10基因序列,并明确了其组织与细胞时序表达特性,综合过表达和干扰结果发现KLF10促进山羊肌内前体脂肪细胞分化,并且这种调控作用可能是协同该家族部分成员通过C/EBPα来实现的。