禽腺病毒作为一种严重威胁养禽业发展的传染病病原,自2015年以来在我国大面积流行,其主要引起禽类肝炎、心包积液为特征的疾病。根据禽腺病毒垂直传播、隐性感染等传播特性并结合流行病学调查分析,对于我国养禽业存在的禽腺病毒感染不可轻视。本研究深入了解禽腺病毒不同血清型毒株之间的遗传进化关系,建立可以覆盖所有血清型的禽腺病毒抗体监测方法,以期用于禽源活疫苗的外源病毒检验（鸡检查法）,同时探索用于临床样本检测。本研究针对实验室保存的12种血清型禽腺病毒代表毒株的Hexon基因与Penton基因进行克隆、测序分析,将测序结果与NCBI中公布的标准序列进行比对。通过核苷酸序列分析发现Hexon基因与标准毒株同源性除E7为98.7%外,其余血清型毒株同源性均高于99%,其中C10、D2、D3、E8a、E8b株同源性均为100%,同种不同血清型之间的同源性为80.4%-99.1%。Penton基因D9株与标准毒株的同源性为97.5%,A1株为99%,B5株为99.2%,其余9种血清型毒株的同源性均为100%,同种不同血清型之间的同源性为95.5%-99.6%。实验结果表明实验室保存毒株与国际标准毒株高度一致,并且Penton基因比Hexon基因更为保守。ELISA方法因其操作简便、耗时较短、灵敏度高等优势,被普遍应用于病毒抗体监测。ELISA方法的建立需要背景清晰的质控血清,因此,本研究通过对禽腺病毒培养、SPF鸡免疫等方式,制备了A、B、C、D、E 5种代表毒株的质控血清。选取保守性更好的Penton基因进行以大肠杆菌为宿主菌的密码子优化,使用原核表达系统对Penton蛋白进行表达,成功大量表达纯化了Penton蛋白。从而建立了以4μg/m L的Penton蛋白进行抗原包被,1:40进行待检血清稀释,1:6000对禽腺病毒Penton单克隆抗体进行稀释的竞争ELISA方法。该方法可以有效检出禽腺病毒A、B、C、D、E 5种基因型的阳性血清,并且与其它常见禽类病毒病无交叉反应现象。同时为了了解禽腺病毒Penton单克隆抗体与禽腺病毒属其它种之间是否有免疫反应,本文成功构建了真核表达系统联合IFA实验的抗原表位鉴定方法,此方法操作简便,耗时短,并且可以鉴定构象表位。通过此方法,对禽腺病毒Penton单克隆抗体初步进行抗原表位鉴定。试验结果表明,禽腺病毒Penton单克隆抗体抗原表位为115GLQRVLITDDQRRP128,通过序列比对分析及BLAST发现此段序列保守性较好。