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卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肉质鲜美,生长速度快,可摄食人工配合饲料,是我国热带、亚热带海域重要的网箱养殖鱼类之一。然而近年来由于病害频发,给卵形鲳鲹养殖产业造成了极大的经济损失。因此,研究卵形鲳鲹免疫基因与抗病性状关联性,确定免疫分子标记,建立免疫防控技术,对支撑卵形鲳鲹养殖产业的健康发展具有重要意义。本研究从实验室前期测序获得的卵形鲳鲹基因组和转录组数据库中获取了主要组织相容性复合体Ⅱβ(majorhistocompatibility complexⅡβ,MHCⅡβ)和γ-干扰素诱导的溶酶体巯基还原酶(interferon-γ-inducible lysosomal thiol reductase,GILT)的部分序列,利用RACE技术克隆获得MHCⅡβ和GILT基因cDNA全序列,以此为基础比对基因组数据库,获得了MHCⅡβ和GILT基因组全序列,分析了其组织表达和细菌感染前后表达谱特征,筛选了基因多态性位点,分析了基因多态性与抗菌性状的相关性,取得的主要结果如下:一、卵形鲳鲹MHCⅡβ表达调控及其基因多态性与抗菌性状的关联分析结论:ToMHCⅡβcDNA全长为1472 bp,开放阅读框(ORF)747 bp,编码248个氨基酸。系统进化树分析显示卵形鲳鲹与其他鱼类亲缘关系较近,与两栖类和哺乳类的亲缘关系较远。组织表达分析表明MHCⅡβmRNA在卵形鲳鲹13个组织中均有表达,在脾和头肾中表达量较高,在鳍中表达量最低。感染美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)后,卵形鲳鯵MHCⅡβmRNA在在肝、脾、头肾、肠四个组织中总体均有上调表达。本研究对核苷酸多态性分析发现,在278 bp的序列中并未发现缺失、移码和插入突变,序列中共发现了69个核苷酸突变位点,变异率为24.8%,其中存在6个双核苷酸突变区,7个三核苷酸突变区,2个四核苷酸突变区。整个核苷酸突变的热点区域分布于18-50bp之间。实验发现278 bp的核苷酸序列翻译为由72个氨基酸组成的多肽序列,有28个位点是多态的,变异率为38.29%。通过比对将下列5个氨基酸位点作为PBR位点进行进一步分析,统计分析表明,所有序列在PBRs区的平均w值为6.60(>1),证明该区域的核苷酸多样性受正向选择的影响。对获得的基因在抗感组和易感组中进行频率分布的统计分析,其中有6个只出现在抗感群体中,有13个只出现在易感群体中,最终,有6个被选做下一步的统计分析中,并对其在两组中的分布频率进行显著性分析。结果显示,TO-DAB-01在抗感群体中的分布频率(0.223)要显著地高于在易感群体中的分布频率(0.058)(P<0.01),而TO-DAB-04,TO-DAB-05,和TO-DAB-10在易感群体中的分布频率(0.045,0.120,0.063)要显著地高于在抗病群体中的分布频率(0.008,0.050,0.020)(P<0.01)。因此可以初步推断,TO-DAB-01与卵形鲳鲹对美人鱼发光杆菌的抗感性显著相关,而TO-DAB-04,TO-DAB-05,和TO-DAB-10与卵形鲳鲹对美人鱼发光杆菌的易感染性具有显著关联性。为探讨卵形鲳鲹基因组中存在的MHCⅡβ基因位点数目,对每个个体的5个阳性克隆序列进行了比对分析,结果表明,单个个体所检测的单倍型数目介于2-3之间,暗示在卵形鲳鲹基因组中至少存在2个MHCⅡβ基因位点。二、卵形鲳鲹GILT表达调控及其基因多态性与抗菌性状的关联分析结论:ToGILT基因全长6837bp,包括7个外显子,6个内含子,符合GT-AG规则。包括232 bp的5′UTR,771 bp的ORF和1746 bp的3′UTR。在起始点上游以及906bp存在启动元件CAAT盒,微卫星片段用方框表示。ToGILT基因共编码256个氨基酸,其理论相对分子量和理论等电点约为28.6kD和5.97。GILT基因cDNA全长2749 bp,功能基序位点有蛋白激酶A(PKA)(77NSG79)、蛋白激酶G(PKG)(77NSG79),5个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,3个N-豆蔻酰基化位点,胰岛素受体C(INSR)(51EYI53、176EYT178)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)(153TSD155、157TST159),未发现糖基化位点,但有四个保守的半胱氨酸残基。通过检测ToGILT mRNA在卵形鲳鲹各组织中相对表达量。结果显示ToGILT mRNA在13个组织中均有表达。其中在肌肉的表达量最低,脾中的表达量最高肝脏和头肾中的表达量与其他组织的表达量存在显著差异(P<0.05)。同样感染美人鱼发光杆菌后,ToGILT mRNA在肝、脾、头肾、肠四个组织中总体均有上调表达。肝和肠组织在感染细菌后,表达量开始上调,在24 h的表达量达到最高,然后开始有下降的趋势;脾和头肾组织的表达量开始上调,在12h表达量最高,然后开始有下调趋势,在72 h时基本回复初始表达量。ToGILT基因存在一个SNP位点,其中基因型CG在易感群体中的分布频率(0.852)分别要显著地高于在抗感群体中的分布频率(0.148)(P<0.01);基因型CC在抗感群体中的分布频率(0.612)分别要显著地高于在抗感群体中的分布频率(0.388)(P<0.05)。本研究旨在探索卵形鲳鲹的免疫调控机理,为将来进一步研究打下基础。