肾虚质大鼠海马区神经元细胞凋亡与肾藏象理论相关研究

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目的:根据中医“恐伤肾”理论,构造先天不足加后天恐吓的肾虚质模型大鼠,观察模型鼠的学习记忆及海马神经元细胞凋亡变化。通过运用药物对肾虚质模型鼠进行干预,观察其对海马神经元细胞凋亡变化的影响,进一步验证了中医的经典理论,同时为临床治疗肾虚体质提供了实验基础。  方法:使用土猫恐吓孕鼠,再恐吓模型仔鼠,制备肾虚质动物模型,将其分为空白组、肾虚质模型组、补肾组、补心组和疏肝组,每组12只仔鼠,并分别给予六味地黄丸、逍遥丸、天王补心丸按0.9375g/kg/d配置悬浊液进行干预。使用水迷宫行为学,检测模型鼠的学习记忆能力。取脑组织进行冰冻切片,运用免疫组化法测定caspase-3的表达,及原位末端标记法(tunel)测定海马细胞NF-κB的表达。  结果:  ①一般状况:肾虚质模型组孕鼠产子减少,仔鼠生长发育缓慢,肾虚质模型组16周龄仔鼠体重减轻、倦怠嗜卧、二便排泄增多。与肾虚质模型组比较,各药物干预组上述体征均有所改善。  ②在水迷宫测试中,与空白组比较,肾虚质模型组潜伏期延长、路程增长、穿越目标区域次数减少。与肾虚质模型组比较,药物干预组潜伏期和路程均有所缩短,穿越次数增多,组间对比有显著差异。与补肾组相比,补心组和疏肝组潜伏期和路程明显增加,穿越次数减少,有统计学意义。  ③caspase-3免疫组化测定:空白组少有阳性细胞表达,肾虚质模型组出现较多的阳性细胞表达,且细胞核出现固缩和空泡样坏死,与空白组对比,肾虚质模型组阳性细胞明显增多,有统计学意义,与肾虚质模型组比较,药物干预组较其阳性细胞表达减少,有统计学意义,与补肾组相比,补心组(P<0.05)和疏肝组(P<0.01)较阳性细胞表达增多。  ④tunel标记NF-κB测定:与空白组相比,肾虚质模型组,出现大量棕色颗粒,而空白组几乎没有表达,有统计学意义。与肾虚质模型组相比,补肾组(P<0.01)和补心组(P<0.01)及疏肝组的阳性细胞表达均明显减少。与补肾组比较,疏肝组(P<0.01)和补心组(P<0.05)棕色细胞表达增多,均有统计学意义。  结论:学习记忆下降与海马神经元细胞凋亡相关。恐惧会导致海马损伤,引起海马神经元细胞凋亡;补肾方药可以改善神经元细胞凋亡,且补肾方药较补心方药和疏肝方药效果显著。这与中医的“肾藏精”和“恐伤肾”理论认识相一致。通过补肾填精的治法,可以减少和修复海马神经元细胞的凋亡,提高学习记忆水平。
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