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目的 血清对氧磷酶是存在于高密度脂蛋白分子中的一种酶(Parao xonase,PON),能水解脂质过氧化物,保护低密度脂蛋白不受氧化修饰,减少氧化型脂质沉积,具有抗动脉粥样硬化作用,是高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化的主要机制之一,进一步研究证实,家族性杂合子型高胆固醇血症和糖尿病患者血清中的PON活性也都比正常对照组低,由于这两类病人都易患As,因而推测PON与As的发生发展有密切联系。糖尿病人群由于动脉粥样硬化发生冠心病,缺血性脑血管病,肢端坏疽等并发症均明显高于非糖尿病人群,超声多普勒检查能较早地发现下肢血管病变,我们采用超声检测糖尿病患者下肢动脉粥样硬化的程度,并采用分光光度计于270nm波长测定吸光度值法,检测糖尿病动脉粥样硬化患者血清对氧磷酯酶活性的变化,探讨PON对糖尿病动脉粥样硬化患者的影响作用。 材料与方法 健康对照组选取我院门诊体检的健康成人20名,无心、肝肾疾病。糖尿病患者来自我院2002-2003年住院患者,符合1997年美国糖尿病协会(ADA)诊断标准。PON活性测定采用分光光度计于270nm波长测定吸光度值法,取反应缓冲液(CaCl2 2mol/L.Tris/HCL 0.1mmol/L,调PH=8.0)2.6ml,加入5mmlo/L的乙酸苯酯300ml,于25℃预温20min后,加入1:10倍稀释的样本血清50ml(稀释液为反应缓冲液),反应90S,用0.5mol/L,EDTA 100μl终止反应。然后用分光光度计于270nm波长测定吸光度值,同时设立血清对照和底物对照。所用底物每次均现配。酶活性按下式计算: PON活性kv/L=(A×103×f×FV)/(t×SV×L×ε) 结果 1、糖尿病两组与正常对照组测得血糖、甘油三酯、胆周醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平、PON水平见表2。2、糖尿病无下肢动脉粥样硬化组血浆PON活性水平低于正常对照组(P<0 .01),糖尿病有下肢动脉粥样硬化组血浆PON活性水平低于无下肢动脉粥样硬化组(P<0.05),有明显统计学意义。3、正常人血清PON活性与其TG、TC、HDL一C和LDL一C,APoB含量无相关性(P>0.01)。4、PON的Km:以双倒数(林一贝氏)作图法求得的PON Km值为0 .87FL,该值与文献报道的KIll=(0.85土0.04)moFL接近。讨论 对氧磷酶是存在于高密度脂蛋白分子中的一种酶,它能水解对氧磷类有机磷化合物和高密度脂蛋白上的氧化型磷脂,因其具有抗动脉粥样硬化作用而日益受到重视。糖尿病动脉粥样硬化是糖尿病的慢性并发症之一,糖尿病大中动脉粥样硬化主要侵犯主动脉、冠状动脉、脑动脉、肾动脉和肢体外周动脉等。肢体外周动脉粥样硬化常以下肢动脉病变为主。本研究中我们应用多普勒超声检查下肢动脉,并对病变定位和病变严重程度进行判断,我们发现55例糖尿病患者血浆PoN活性水平低于正常对照组,其中糖尿病伴下肢动脉粥样硬化组血浆PON活性水平低于无下肢动脉粥样硬化组,并随着动脉粥样硬化病变程度加重,PON活性进一步下降,预示着PON可能是糖尿病及动脉粥样硬化发生发展中的影响因素。 Michael等通过实验证实血浆PON活性下降与胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)和家族性高胆固醇血症(FH)有关,血浆PON与HDL相关,已经被大量实验所证实,HDL的抗脂质氧化修饰作用现已十分明确,PON作为HDL组成部分,直接参与血中脂质过氧化物的水解并具有防止过氧化物在LDL的聚集作用,因此,血清PoN活性高低可以反映HDL抗脂质氧化的能力,PON活性下降也发生在CHD病人,并发CHD的糖尿病患者,在CHD发作之前,血清PON活性同样也明显降低,研究发现PON活性长期低下会增加动脉硬化的易感性,而且急性感染造成PON活性急剧下降可以加速LDL的氧化,使泡沫细胞在一个已有动脉粥样硬化的损伤处加速产生,削弱它的纤维帽,使其破裂,由于随着在破裂的损伤表面的凝血块而发生急性缺血。 目前的报告已经证实在FH和DM患者与正常对照组比较中PoN活性下降有很大的统计学意义,而HDL一C水平的变化意义较小,说明PoN的活性下降不依赖于HDL,其不应看作是HDL的载脂蛋白,PoN活性下降原因可能由于糖尿病患者存在酶基因的缺陷,这些因素导致酶合成减少或PON抑制剂产生增多。本实验中糖尿病组PON的活性低于正常对照组,说明了PON活性与糖尿病有关。 FH和DM都与动脉粥样硬化有关,目前的研究也证实了他们都与PON活性下降有关,这已在CHD患者中报告,即N可能阻止大范围组织磷酸醋化,在脂代谢中有一定生理作用。现关于动脉粥样硬化的发生的理论是LDL受到氧化修饰,血清LDL的氧化是As发展的早期步骤,Mackness等发现血清对氧磷酶可能在这一过程的起始阶段通过水解氧化磷脂而保护LDL免受氧化修饰,从而抑制动脉粥样硬化,在体外实验中,PON能以LDL为载体,水解OX一LDL降低其毒性从而抑制动脉粥样硬化的过程。 我们通过实验证实在糖尿病和动脉粥样硬化的患者中氧化修饰LDL水平增加,说明上述2种条件可使PON活性下降,从而导致脂醋毒性积聚,因此糖尿病可加速动脉粥样硬化的进程。本实验中,健康成人血清PON活性与PG、Tc、HDL一c、LDL一C及ApoB的含?