【摘 要】
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马立克氏病(Mareks Disease,MD)是由马立克氏病病毒(MareksDisease Virus,MDV)引起的一种鸡的恶性淋巴细胞增生性肿瘤疾病,具有高度接触传染性,可在各种内脏器官、皮肤等多处诱发
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马立克氏病(Mareks Disease,MD)是由马立克氏病病毒(MareksDisease Virus,MDV)引起的一种鸡的恶性淋巴细胞增生性肿瘤疾病,具有高度接触传染性,可在各种内脏器官、皮肤等多处诱发广泛性淋巴细胞增生性肿瘤。感染后大量淋巴细胞发生损伤和转化,引起鸡体持续性免疫抑制、导致患病鸡群原发或继发感染引起的死淘率升高。随着MD毒株毒力不断增强,通过疫苗免疫已不能为商业鸡群提供完全保护力,给目前养禽业带来巨大的损失。一般在生产上使用基于疫苗株与野毒株132-bpr基因拷贝数差异而建立的多聚酶链式反应(PCR)检测方法进行MDV感染快速诊断,但由于疫苗免疫、个体差异和不同毒株的体内复制能力不同等因素共同作用,造成检出率偏低,诊断准确性不足,本试验旨在建立一种更为准确的MDV感染PCR检测方法。
meq基因作为MDV特有的致瘤相关基因,在不同毒株间的序列保守性较高,而且其能在感染细胞和转化肿瘤组织细胞中高度表达。因此,本研究基于其上述特点,将其确定为建立的PCR检测方法的靶基因,通过生物软件设计出一对扩增其部分保守序列的引物,建立起一种用于快速诊断MDV感染的PCR检测方法。随后,将所建立方法与其他检测MDV感染的PCR方法即实时定量PCR检测方法和132-bpr检测方法,对强毒株攻毒试验中采集的140份组织脏器样品进行检测对比试验。
实时定量PCR检测方法虽然具有最高的检测准确性,但是其仪器与试剂价格昂贵,造成检测成本过高,不适合于基础实验室的检测应用。132-bpr基因PCR检测方法优点在可以区分MDV强弱毒株,仪器与试剂价格较合理,适合于生产上的大批量样品诊断检测,但存在假阴性的情况,造成检出率偏低;所建立的针对meq基因的PCR检测方法,检测成本合理,而且具有较高的检出率,在样品检测中表现出更好的灵敏度,提高了检测的准确性。综合检测灵敏度、试验耗时和检测成本等多方面对比后得出结论,本课题所建立的meq基因PCR检测方法是一种快速、敏感、简便的MDV感染检测技术。
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