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目的：本文通过观察外源性人程序性死亡基因5(programmed cell death 5,PDCD5)对米非司酮诱导的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响,初步探讨其与米非司酮在前列腺癌治疗中的协同作用,为前列腺癌的临床治疗提供实验基础。
方法：本实验首先用RT-PCR方法从人胎盘组织中获取PDCD5基因,将其克隆入真核表达载体PCI-neo,测序判断正确后,用脂质体法转染PCI-neo-PDCD5于PC-3M细胞,免疫荧光法检测转染是否成功及转染效率；培养前列腺癌PC-3M细胞,用1、10、20、50和100μmol/L米非司酮(MIF)作用于该细胞24、48、72、96h,MTT法检测米非司酮对前列腺癌细胞增殖的抑制作用,并选出最佳浓度及作用时间(最佳浓度20μmol/L,最佳作用时间48h);在转染PDCD5的细胞中加入20μmol/L MIF培养24、48h,MTT比色法检测细胞增殖,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变,Western-blot检测凋亡相关基因Caspase-3的表达变化。
结果：成功构建了PCI-neo-PDCD5真核表达载体并在转染的PC-3M细胞中得到了瞬时表达；MTT实验表明,与对照组相比,1、10μmol/L MIF组的A值,差异无统计学意义(P>0.05),20、50和100μmol/L MIF组的A值差异有统计学意义(P<0.01),MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间、剂量依赖性；转染PCI-neo-PDCD5并加入20μmol/L MIF后,与对照组及单独应用MIF组相比,细胞生长明显受到抑制(P<0.01),细胞凋亡率显著增加(P<0.01),透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征(表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等),Caspase-3在PDCD5与MIF联合作用中表达明显增加。
结论：本实验明确了外源性的PDCD5在米非司酮诱导的前列腺癌细胞凋亡中有明显的正协同作用,使其有望成为前列腺癌临床治疗的一个辅助治疗药物,也为继续探讨PDCD5在肿瘤治疗方面的作用开拓了新的思路。