【摘 要】
：
目的糖尿病是胰岛β细胞功能障碍伴或不伴胰岛素抵抗的代谢性疾病,目前无法根治。已有研究表明,来源于人脱落乳牙的间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）可以改善2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者的糖代谢与胰岛功能,降低T2DM大鼠的血糖与改善胰岛素抵抗。MSC是一种可以自我更新,具有分化为多种类型细胞潜能的细胞。我们通过Transwe
论文部分内容阅读
目的糖尿病是胰岛β细胞功能障碍伴或不伴胰岛素抵抗的代谢性疾病,目前无法根治。已有研究表明,来源于人脱落乳牙的间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）可以改善2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）患者的糖代谢与胰岛功能,降低T2DM大鼠的血糖与改善胰岛素抵抗。MSC是一种可以自我更新,具有分化为多种类型细胞潜能的细胞。我们通过Transwell将MSC与胰岛β细胞进行共培养来探究它们的相互作用及作用机制,这有望为临床应用干细胞治疗糖尿病提供新的思路。方法1、MTT检测链脲佐菌素（STZ）对大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）生长活性的影响,确定适宜的药物浓度及作用时间。2、INS-1与MSC于Transwell装置中进行共培养,使得两种细胞不会直接接触,分别收集上下层细胞进行荧光定量PCR（q RT-PCR）以及琼脂糖凝胶电泳,检测胰岛素相对表达水平。3、INS-1与MSC Transwell共培养后,进行葡萄糖刺激胰岛素分泌实验（GSIS）,评价细胞分泌胰岛素能力。4、INS-1来源的外泌体分离与鉴定:分离采用超速离心法。鉴定方法:Western blotting检测外泌体标志性蛋白;电镜观察分析外泌体的形态;Zetasizer nano series分析外泌体的粒径大小。5、INS-1来源外泌体刺激MSCs,q RT-PCR以及琼脂糖凝胶电泳检测MSCs胰岛素表达情况。6、INS-1与MSC Transwell共培养后,流式细胞术检测MSCs对经STZ处理的INS-1凋亡的影响。7、INS-1与MSC Transwell共培养后,Western blotting检测MSCs对经STZ处理的INS-1凋亡的影响。结果1、INS-1经STZ处理后,MTT实验表明INS-1细胞生长活性受到抑制,当STZ浓度为5m M,处理时间为24h时,INS-1活性下降约40%,我们把这作为后续STZ处理INS-1的条件。2、共培养后,q RT-PCR与琼脂糖凝胶电泳结果表明,MSCs可以改善经STZ处理的INS-1胰岛素表达;INS-1可以诱导MSCs分化,使MSCs表达胰岛素,经STZ处理的INS-1诱导能力变弱。3、共培养后,GSIS实验结果表明,高糖刺激可以提高细胞胰岛素分泌量;MSCs能提高INS-1胰岛素分泌水平;被INS-1诱导分化的MSCs可以分泌胰岛素。4、Western blotting鉴定外泌体标志蛋白,结果表明CD81和TSG101蛋白呈阳性;电镜显示外泌体外观如茶托状,符合外泌体的形态特征;粒径检测显示符合外泌体大小（30-150nm）的特征。5、INS-1来源的外泌体干预MSCs,结果表明MSCs能被INS-1来源外泌体诱导分化,分化后的MSCs能表达胰岛素。6、共培养后,流式细胞术检测凋亡结果表明,MSCs可以抑制由STZ引起的INS-1凋亡。7、共培养后,Western blotting结果表明MSCs通过caspase 3通路来抑制由STZ引起的INS-1凋亡。结论MSC与INS-1 Transwell共培养,MSC通过caspase 3通路抑制由STZ引起的INS-1凋亡及改善INS-1胰岛素的表达;INS-1及其外泌体能诱导MSC分化,分化后的MSC能表达胰岛素。
其他文献
由小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）引起的小麦黄花叶病严重影响了小麦生产安全。尽管目前利用生物学和分子生物学已对WYMV有了初步研究,但由于缺乏有效的WYMV侵染性克隆,仍无法利用反向遗传学对WYMV与寄主的互作机理进行研究。本研究成功构建了WYMV的侵染性克隆,并明确了WYMV侵染的最适温度。同时利用该侵染性克隆,对Ta WRKY22在小麦抗WYMV中
我国是世界上淡水珍珠生产和出口大国,但传统养殖模式下产出的珍珠品质参差不齐,还导致严重的水体污染。随着相关限养禁养令的出台,珍珠养殖产量大、品质低的产业特征亟待改善,必须建立起与生态环境更友好的养殖模式。在水产养殖过程中,养殖水质和细菌对水生生物的生长发育和疾病防治有至关重要的作用。本研究主要探究饵料微藻,外源钙离子、培育方式和益生菌对三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）养殖水质（pH
目的:利用组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂进行表观遗传治疗已成为新药开发中一个重要领域。DNA甲基化和组蛋白乙酰化是调控白血病发生发展的重要表观遗传学途径。在之前的研究课题中我们基于苯甲酰胺片段选择性抑制Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶的特征,设计了N-（2-氨基苯基）苯甲酰胺吖啶类似物8a-8p。分子对接、体外酶活性筛选和进一步的机理研究验证了目标化合物具有选择性抑制HDAC1酶活性作用,并显著抑制白血病
小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）是一种植物RNA病毒,主要由土壤中的禾谷多黏菌进行传播,每年都会给我国的小麦生产带来严重损失。为了解析WYMV致病及逃避植物寄主防御的分子机制,本研究以WYMV P1蛋白为诱饵来捕获与之相互作用的寄主因子。通过实验,最终一共得到了9个可能与P1互作的寄主因子,其中候选寄主因子“ubiquitin-specific pro
目的白细胞介素（interleukin,IL）-41又名Metrnl,它是一种与神经营养蛋白Metrn同源的新型细胞因子,能够调节脂质代谢和炎症反应。但IL-41对肝损伤的影响还未见报道。刀豆蛋白A（concanavalin A,Con A）诱导的肝损伤模型被运用于各种肝炎疾病的研究。本研究通过Con A诱导小鼠急性肝损伤,研究IL-41在小鼠肝损伤中的作用及机制,为临床自身免疫性肝脏疾病的治疗提
鱼类常见病原菌迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）为革兰氏阴性菌,且能入侵并在宿主吞噬细胞内复制,具有宿主范围广的特点。然而目前迟缓爱德华氏菌进入鱼类单核/巨噬细胞（monocytes/macrophages,MO/MΦ）的机制尚不清楚,对于这一机制的理解,有助于寻找合适的抗病策略。迟缓爱德华氏菌感染的大弹涂鱼（Boleophthalmus pectinirostri,mudsk
背景:视网膜病变是糖尿病患者严重的并发症之一。糖尿病视网膜病变（Diabetic retinopathy,DR）也是劳动年龄人群视力损伤的主要原因,多数患者在进入晚期前并无明显症状,早发现有益于减缓症状和发病进程,早期筛查糖尿病患者是否有眼部病变尤为重要。外泌体是盘状的双层膜囊泡,主要起到信息传递和胞间调节作用,其内含物m RNA可作为有潜力的非侵入性糖尿病视网膜病变早期筛查标志物。目的:本次研究
目的炎症性肠病是慢性肠道疾病的一种,目前仅指溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）。右旋糖酐硫酸钠盐（Dextran sodium sulfate,DSS）是诱导实验性小鼠UC的常用药物,在饮用水中给药会导致小鼠急性结肠炎。白细胞介素-36受体拮抗剂（Interleukin 36 receptor antagonist,IL-3
胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,胃癌诊断主要依赖内镜检查、组织活检和血液肿瘤标志物检测等。胃镜活检是一项有创检查,目前临床上使用的胃癌标志物的灵敏度和特异度也不高,因此寻找胃癌新型标志物将有可能提高胃癌的诊断水平。由于环状RNA（circular RNA,circRNA）具有结构稳定和广泛存在于各种体液中的特点,探索与胃癌相关的circRNA作为标志物,为胃癌的诊断、预后和有效治疗创造新可能
研究目的缺血性脑卒中是危害老年人健康重要疾病,但目前尚无有效治疗策略。缺血性脑卒中病理特征包括血脑屏障功能障碍和神经元损伤,疾病期间血脑屏障更具渗透性,允许大分子进入大脑发挥活性。此外,缺血性脑卒中诱导受损细胞释放腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）,过度激活P2X嘌呤受体4（P2X purinoreceptor 4,P2X4R）,通过下游p38信号通路促进神经