【摘 要】
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由小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）引起的小麦黄花叶病严重影响了小麦生产安全。尽管目前利用生物学和分子生物学已对WYMV有了初步研究,但由于缺乏有效的WYMV侵染性克隆,仍无法利用反向遗传学对WYMV与寄主的互作机理进行研究。本研究成功构建了WYMV的侵染性克隆,并明确了WYMV侵染的最适温度。同时利用该侵染性克隆,对Ta WRKY22在小麦抗WYMV中
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由小麦黄花叶病毒（Wheat yellow mosaic virus,WYMV）引起的小麦黄花叶病严重影响了小麦生产安全。尽管目前利用生物学和分子生物学已对WYMV有了初步研究,但由于缺乏有效的WYMV侵染性克隆,仍无法利用反向遗传学对WYMV与寄主的互作机理进行研究。本研究成功构建了WYMV的侵染性克隆,并明确了WYMV侵染的最适温度。同时利用该侵染性克隆,对Ta WRKY22在小麦抗WYMV中的功能进行了初步分析。主要的研究结果如下:本研究构建了35S启动子控制下的WYMV全长c DNA克隆,通过利用RT-PCR、Western bolt、病毒粒子提取及观察等方法发现农杆菌介导的转化方法无法实现WYMV在小麦中的系统性侵染;此外,还构建了SP6启动子控制下的WYMV全长侵染性克隆,利用体外转录获得WYMV基因组RNA,通过摩擦接毒的方式发现WYMV在小麦中能够系统侵染。利用构建成功的WYMV侵染性克隆,明确WYMV的最适侵染温度为8℃;进一步研究发现,CWMV能够促进WYMV的侵染,而WYMV能够抑制CWMV的侵染。我们还利用该侵染性克隆对小麦抗病相关基因Ta WRKY22进行研究,发现Ta WRKY22受WYMV的诱导表达,并发现Ta WRKY22在小麦抗WYMV侵染的过程中起到负调控作用。以上研究结果表明,本实验构建的WYMV侵染性克隆能够有效促进WYMV的系统性侵染,从而为利用反向遗传学系统研究WYMV的侵染机制及WYMV与小麦的互作机理研究奠定基础。
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