【摘 要】
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目的:筛选与胃癌相关的差异表达miRNA并分析可能的作用机制;探讨miR-301在胃癌细胞株的侵袭、迁移、凋亡调控过程中的发挥的作用及分子机制。方法:1.使用生物信息学技术筛选与胃癌相关的差异表达miRNA,预测其靶基因。2.应用实时定量PCR方法检测胃癌、癌旁组织及胃癌细胞株中miR-301的表达水平。3.应用miR-301抑制物转染胃癌细胞株后,以划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁
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目的:筛选与胃癌相关的差异表达miRNA并分析可能的作用机制;探讨miR-301在胃癌细胞株的侵袭、迁移、凋亡调控过程中的发挥的作用及分子机制。方法:1.使用生物信息学技术筛选与胃癌相关的差异表达miRNA,预测其靶基因。2.应用实时定量PCR方法检测胃癌、癌旁组织及胃癌细胞株中miR-301的表达水平。3.应用miR-301抑制物转染胃癌细胞株后,以划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变,以流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,应用实时定量PCR和蛋白质印迹检测EMT标志物及凋亡相关基因及蛋白表达的变化。4.以生物信息学技术及双荧光素酶报告基因分析检测miR-301直接调控的基因。结果:1.miR-301在胃癌病人和正常人中差异表达,NKIRAS2、ITM2A可能是miR-301的靶基因;2.胃癌组织miR-301水平高于癌旁组织（P＜0.001）,胃癌细胞株的miR-301水平高于GES-1（P＜0.001）;3.抑制物转染胃癌细胞株后细胞的活性低于对照组（P＜0.05）,迁移、侵袭能力下降（P＜0.001）,细胞凋亡率增高（P＜0.05）;4.抑制物转染胃癌细胞株后细胞EMT相关基因N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin的表达增高（P＜0.05）,凋亡相关基因Bcl-2、Survivin表达降低,Bad的表达增高（P＜0.05）;5.荧光素酶报告基因分析显示,miR-301可直接抑制NKIRAS2、ITM2A的表达。结论:1.miR-301在胃癌组织中高表达;2.miR-301影响胃癌细胞的侵袭、迁移及凋亡过程;3.NKRAS2、ITM2A是miR-301的靶基因。4.胃癌的进展机制可能与miR-301抑制NKIRAS2影响肿瘤侵袭、迁移,与抑制ITM2A表达影响肿瘤的凋亡过程有关。
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