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目的:建立特应性皮炎BALB/c小鼠模型,对特应性皮炎小鼠模型皮损部位的FLG和Caspasel4蛋白表达情况进行检测分析,探讨特应性皮炎皮肤屏障功能障碍时FLG和Caspasel4蛋白表达情况,为特应性皮炎BALB/c小鼠模型在皮肤代谢方面提供参考数据。 方法:实验选用BALB/c小鼠,约为20g的SPF级雌性纯系、6-8周的小鼠60只。随机分为AD组与正常对照组,每组均为30只。实验前7天对两组小鼠背部进行脱毛处理,脱毛采用8%硫化钠淀粉溶液,脱毛面积约3.0cm x2.5cm。AD组小鼠模型皮肤致敏和激发的方法:用0.5%DNFB溶液作为致敏剂涂抹于小鼠背部脱毛部位。对AD组小鼠背部涂抹0.5%DNFB致敏剂在实验的第1天和第2天各1次,每次涂抹0.5%DNFB致敏剂的量为100ul,实验的第3天到第6天对AD组小鼠背部不作处理,在第7天到28之间每隔2天对AD组小鼠背部涂抹1次0.5%DNFB致敏剂,一共涂抹10次0.5%DNFB致敏剂,每次涂抹0.5%DNFB致敏剂的量为70uL。正常对照组小鼠模型的建立:对正常对照组小鼠背部脱毛部位仅涂抹不含DNFB的丙酮/橄榄油溶液,每次涂抹的剂量及时间与实验组小鼠相一致。特应性皮炎小鼠模型建立完成后,通过将10%水合氯醛注射到小鼠腹腔中,对AD组及正常对照组小鼠进行后摘取右侧眼球取血,在37℃环境下静置10min-20min后,离心后收集血清,测定小鼠血清中IFN-γ及IgE浓度。在无菌条件下取AD组及正常对照组小鼠背部皮损部位组织,HE染色后的皮肤组织经显微镜观察其病理改变。在无菌条件下取AD组及正常对照组小鼠背部皮损部位组织,进行免疫印迹实验,检测特应性皮炎BALB/c小鼠模型皮损处皮肤的FLG及Caspase-14蛋白表达情况。 结果: 1.AD组与正常对照组进行皮肤炎症程度评分,相比较显示,AD组评分较对照组高,差异有统计学意义(P<0.001)。进行皮肤组织病理学评分后,相比较两组小鼠发现,AD组评分高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。 2.各组组织病理检测结果:正常对照组小鼠皮肤表现正常,组织结构基本正常,未见明显炎性细胞浸润;红斑、丘疹、结痂等改变可在AD组皮损处见到,镜下可见角化过度伴角化不全,棘层肥厚,慢性炎细胞浸润在真皮浅层可见。 3.ELISA检测结果:AD组血清IFN-γ(62.69±12.33)的水平明显高于正常对照组IFN-γ(11.42±5.64),差异有统计学意义(P<0.001)。AD组血清IgE(86.64±38.58)的水平明显高于正常对照组IgE(38.8±13.13),差异有统计学意义(P<0.001)。IgE、IFN-γ与AD的患病程度相关系数分别是0.742和0.612,为显著正相关,差异有统计学意义(P<0.001)。 4.Wester Blot检测结果:AD组皮损部位FLG蛋白相对表达量(0.97±0.22)低于正常对照组FLG(1.17±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。AD组皮损部位Caspase-l4蛋白相对表达量(1.33±0.29)低于正常对照组Caspase-l4(1.52±0.23),差异有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.AD小鼠模型血清中IFN-γ和IgE与AD有明显相关性,是AD的危险因素; 2.皮损处皮肤组织中的FLG及Caspase-l4蛋白表达明显降低,认为可能与表皮屏障功能受损有关。