【摘 要】
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RNA广泛存在于生命活动的各个过程，并在其中发挥着重要的功能。但是，人们对细胞外RNA（extracellular RNA，eRNA）还知之甚少。microRNA（miRNA）的发现使我们对基因表达调控有了一个全新的认识，但是miRNA前体的加工途径的精细过程还不是很清楚。 为了探索细胞外RNA的生物学功能，本研究以HepG2细胞为研究模型，通过RNA酶A的对细胞的离散作用及
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RNA广泛存在于生命活动的各个过程，并在其中发挥着重要的功能。但是，人们对细胞外RNA（extracellular RNA，eRNA）还知之甚少。microRNA（miRNA）的发现使我们对基因表达调控有了一个全新的认识，但是miRNA前体的加工途径的精细过程还不是很清楚。 为了探索细胞外RNA的生物学功能，本研究以HepG2细胞为研究模型，通过RNA酶A的对细胞的离散作用及RNA抗体的细胞免疫荧光实验验证了细胞表面RNA分子的存在，研究了细胞培养液中RNA含量的变化。通过冻干法富集了细胞培养液中的RNA，并采用本室建立的RNA克隆方法对其进行了克隆。同时我们利用酵母三杂交技术筛选了本室克隆出的新的microRNA—48前体的相互作用蛋白。本研究取得的具体进展如下： 1．用RNA抗体细胞免疫荧光检测，证实了HepG2细胞表面存在RNA分子。 2．发现RNA酶A能使HepG2细胞离散，迁移能力增强，细胞表面伪足增加。 3．检测了HepG2细胞生长过程中培养液中和细胞表面RNA含量的变化。 4．建立了冻干浓缩提取细胞培养液中RNA的方法，并建立了细胞培养液RNA克隆方法，得到了若干条细胞培养液中的RNA，其中包括rRNA片段、人延伸因子1α亚单位、线粒体RNA片段和立克次氏体RNA，其中一条位于15号染色体CpG岛区的28nt的RNA与新发现的piRNA有很高的相似性。 5．用酵母三杂交技术得到了microRNA-483前体候选相互作用蛋白，其中C14OFR108和ZNF43得到了回转验证。 RNA在生命活动中的作用已经得到了人们的认可。细胞外RNA的研究也已经初见端倪，本研究以证实了细胞外RNA的存在，建立了细胞外液RNA的提取和克隆方法，获得了一些有特点的RNA；为细胞外RNA的研究建立了新的方法，。可以用于疾病的检测，同时为深入研究RNA在生命活动过程中的作用奠定了良好的基础。通过酵母三杂交技术筛选了与microRNA—483相互作用的蛋白质，为microRNA-483的加工机制研究提供了线索，同时为microRNA功能的研究提供了新的思路。
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