Hsa-miR-371a-5p通过调控LEF1影响胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

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【目的】对hsa-miR-371a-5p通过调控LEF1影响胃癌细胞MKN45功能学的机制进行研究,为胃癌的早期诊断与治疗提供新的靶标。【方法】本文主要通过对TCGA数据库数据信息进行分析,预测并得到目标miRNA(hsa-miR-371a-5p)和靶基因(LEF1)。然后采用脂质体介导过表达hsa-miR-371-5p后,通过细胞划痕试验、Transwell、双荧光素酶报告基因、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印记(Western Blot)等实验方法探讨其对胃癌细胞系MKN45的迁移和侵袭能力的影响。【结果】通过数据库信息分析,我们初步推测了hsa-miR-371a-5p和LEF1之间具有负性调控作用,LEF1可能是hsa-miR-371a-5p的靶基因,并且参与了胃癌的发生发展。体外细胞实验进一步验证,和对照组相比,hsa-miR-371a-5p过表达组能抑制MKN45的迁移和侵袭,这表明hsa-miR-371a-5p的表达水平可能与胃癌的发生发展有负相关。双荧光素酶试验的结果表明:和对照组相比,野生型hsa-miR-371a-5p能够通过和LEF1 3’UTR区域的结合而导致相对荧光值降低,这说明hsa-miR-371a-5p与LEF1之间存在负性调控关系;qPCR和Western Blot检测的结果说明:和对照组相比,过表达hsa-miR-371a-5p组中LEF1的表达量及蛋白表达水平明显下降,这表明LEF1是hsa-miR-371a-5p的靶基因之一,hsa-miR-371a-5p可能通过负调控LEF1抑制胃癌的发生发展。【结论】1.hsa-miR-371a-5p通过负调控LEF1,参与胃癌的发生和发展。
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